モノネガウイルスのM蛋白欠損による新型ウイルスワクチン/ベクターの開発

利用单链病毒M蛋白缺陷开发新病毒疫苗/载体

• 批准号: 13876071
• 负责人: 甲斐 知恵子
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13876071/
• 关键词: CDV; リバースジェネティクス; M欠損ウイルス; 次世代ワクチン

本研究は、ウイルス粒子の形成・放出に関与するMタンパク質欠損型の次世代ワクチン開発に向けての基礎的解析を目的としている。我々はイヌジステンパーウイルス(CDV)全ゲノムcDNAクローンを用いて、リバースジェネティクス系の開発に成功しており、M遺伝子を欠損あるいは改変させたウイルスクローンを作出する事が可能となった。これを、CDV-M蛋白発現細胞株と共培養することによって、M遺伝子を欠損した組換えCDV(rCDV-dM)をレスキューし、ウイルスとして回収する事が可能である。rCDV-dMは、これまでの報告からウイルス粒子形成を行なわない、持続感染型の新しいウイルスベクターになる可能性が考えられる。今年度は、まずM蛋白を特異的に認識するポリクロナール抗体を作製して欠損ウイルス作製のツールを整えた。その結果、M発現蛋白やCDV感染細胞と反応できる抗M特異抗体の作製に成功した。また、M発現細胞株の樹立も試みたが、持続的にM蛋白を発現すると障害性が強く細胞株を得る事は困難であった。そこで、M蛋白を任意の時期に発現できるCre/loxPシステムを導入して細胞株樹立を試みている。いくつかの候補細胞株でM蛋白の誘導発現を確認中である。M欠損CDVクローンの構築はデザインが困難であり作製に時間を要しているが、完成次第レスキューを行いM欠損CDVを得る予定である。同時にウイルス膜の裏打ちをするM蛋白の機能解析をrCDV-dMを用いて細胞内での増殖に関する機能や他のウイルス構成蛋白との相互作用やウイルス膜蛋白の細胞外表出に関わる役割、持続感染機構への関与などの分子機能解析を野外株と比較しながら行う予定である。

The purpose of this study is to analyze the relationship between the formation and emission of particles and the development of the next generation of particles with poor quality. We have successfully developed a full-length cDNA library for the purpose of analyzing and analyzing the DNA sequence. CDV(rCDV-dM) is a protein producing cell line that can be co-cultured with CDV(rCDV-dM). rCDV-dM has been reported to be responsible for particle formation and the possibility of new infections. This year, the M protein specific recognition of the antibody to make up for the lack of it The results showed that M expression protein and CDV infected cells were successfully produced. It is difficult to establish and maintain M protein expression in strong cell lines. Cre/loxP system was introduced into the cell line and the expression of M protein was tested at any time. Confirmation of induction of M protein in candidate cell lines The construction of M deficient CDV is difficult. The time of operation is necessary. The completion of M deficient CDV is predetermined. At the same time, the functional analysis of M protein in cell membrane, the function analysis of rCDV-dM protein in cell proliferation, the interaction analysis of M protein in cell membrane, the interaction analysis of M protein in cell surface, the function analysis of M protein in cell culture, the function analysis of M

项目成果

Ikeda, Y., et al.: "Seroprevalence of canine distemper virus in cats"Clin Diagn Lab Immunol.. 8(3). 641-644 (2001)

Ikeda, Y., et al.：“猫中犬瘟热病毒的血清阳性率”Clin Diagn Lab Immunol.. 8(3)。

Yoneda, M. et al.: "Rinderpest virus H protein : role in determining host range in rabbits"J. Gen. Virol.. (in press). (2002)

Yoneda, M. 等人：“牛瘟病毒 H 蛋白：在确定兔子宿主范围中的作用”J。