35型アデノウイルスベクターシステムの開発

本年度は35型アデノウイルスベクターシステムの開発研究として以下の結果を得た。1. 研究代表者らはin vitroライゲーションに基づいたプラスミド構築を利用した簡便なアデノウイルスベクター作製法を開発済みである。そこで、本原理を35型アデノウイルスベクターの作製にも応用し、誰でも簡便に35型アデノウイルスベクターの作製が可能となるシステムの開発に成功した。2. 35型アデノウイルスベクターの臨床応用に向けて、35型アデノウイルスベクターのin vivo遺伝子導入特性を明らかにすることは必要不可欠と思われるが、CD46がマウスで発現していないためマウスをモデル動物として使用することは不可能である。そこで本研究では、CD46安定発現細胞およびCD46TGマウスを用いて35型アデノウイルスベクターのin vitroおよびin vivo遺伝子導入特性について検討した。その結果、35型アデノウイルスベクターがin vitroおよびin vivo遺伝子導入において、CD46を認識し細胞に感染することが確認された。しかしながら、ヒトCD46TGマウスへの全身投与によるin vivo遺伝子導入効率は5型アデノウイルスベクターと比べると依然低く、今後、第2受容体の同定などさらなる検討が必要であると思われた。3. 35型アデノウイルスベクターによる遺伝子導入活性を5型アデノウイルスに対する抗体存在下で検討したところ、遺伝子導入活性の減弱は認めらなかった。成人のほとんどは5型アデノウイルスに対する抗体を有しているが、35型アデノウイルスに対する抗体保持率は低いこと等も考え合わせると、35型アデノウイルスベクターはアデノウイルス抗体を保持しているヒトにおいても効果が期待できること、5型アデノウイルスベクター投与後の2度目のベクター投与に利用できることが明らかとなった。

本年度は35型アデノウイルスベクターシステムの開発研究として以下の結果を得た。1. 研究代表者らはin vitroライゲーションに基づいたプラスミド構築を利用した簡便なアデノウイルスベクター作製法を開発済みである。そこで、本原理を35型アデノウイルスベクターの作製にも応用し、誰でも簡便に35型アデノウイルスベクターの作製が可能となるシステムの開発に成功した。2. 35型アデノウイルスベクターの臨床応用に向けて、35型アデノウイルスベクターのin vivo遺伝子導入特性を明らかにすることは必要不可欠と思われるが、CD46がマウスで発現していないためマウスをモデル動物として使用することは不可能である。そこで本研究では、CD46安定発現細胞およびCD46TGマウスを用いて35型アデノウイルスベクターのin vitroおよびin vivo遺伝子導入特性について検討した。その結果、35型アデノウイルスベクターがin vitroおよびin vivo遺伝子導入において、CD46を認識し細胞に感染することが確認された。しかしながら、ヒトCD46TGマウスへの全身投与によるin vivo遺伝子導入効率は5型アデノウイルスベクターと比べると依然低く、今後、第2受容体の同定などさらなる検討が必要であると思われた。3. 35型アデノウイルスベクターによる遺伝子導入活性を5型アデノウイルスに対する抗体存在下で検討したところ、遺伝子導入活性の減弱は認めらなかった。成人のほとんどは5型アデノウイルスに対する抗体を有しているが、35型アデノウイルスに対する抗体保持率は低いこと等も考え合わせると、35型アデノウイルスベクターはアデノウイルス抗体を保持しているヒトにおいても効果が期待できること、5型アデノウイルスベクター投与後の2度目のベクター投与に利用できることが明らかとなった。