アデノウイルス受容体CARと相同性を有する可溶性新規タンパク質sCARの機能解析

与腺病毒受体CAR同源的可溶性新型蛋白sCAR的功能分析

• 批准号: 17659023
• 负责人: 水口 裕之
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: 独立行政法人医薬基盤研究所
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659023/
• 关键词: 遺伝子治療; アデノウイルス; 受容体; CAR

高効率な遺伝子治療用ベクターとして繁用されているアデノウイルス(Ad)ベクターは、細胞表面受容体であるCAR(coxsackievirus and adenovirus receptor)を介して感染することが知られている。CARは免疫グロブリンスーパーファミリーに属する細胞接着分子であり、このファミリーに属する分子は互いに相同性を有することが知られている。そこで、CARと相同性を有する新規タンパク質を探索するため、ESTデータベースを検索したところ、CARと非常に相同性の高い新規タンパク質sCAR(similar to CAR)を同定することができた。sCARは3つの免疫グロブリン様領域を有した390アミノ酸から成る可溶性タンパク質であった。マウスにおけるsCARの発現をRT-PCRにより検討したところ、肺や心臓、腎臓など多くの組織で発現が見られ、特に脳および卵巣で高い発現が見られた。sCARはCARのAdベクター結合部位とほぼ同様の一次構造を有していたため、次に、Adベクター感染におよぼすsCARの影響を調べた。SK HEP-1細胞にsCAR遺伝子を導入しAdベクターを感染させたところ、親株に比較し有意に感染が阻害された。また、sCAR導入SK HEP-1細胞の培養上清にもAdベクター感染阻害活性が見られた。したがって、sCARはAdベクターおよび野生型Adの生理的感染阻害タンパク質である可能性が示唆された。この可能性をさらに確認するため、現在、sCARのリコンビナントタンパク質を大腸菌あるいはバキュロウイルス等で作成し、このタンパク質によるAdベクターの感染におよぼす影響を検討しているところである。

腺病毒（AD）载体通常用作高效的基因疗法载体，已知通过细胞表面受体（COXSACKIEVIEVIERUS和腺病毒受体）感染。汽车是属于免疫球蛋白超家族的细胞粘附分子，属于该家族的分子彼此具有同源性。因此，为了搜索与汽车同源的新型蛋白质，我们搜索了EST数据库，并找到了一种类似于汽车（疤痕）的新型蛋白质，该蛋白质与汽车高度同源。疤痕是一种可溶性蛋白，由390个氨基酸组成，具有三个免疫球蛋白样区域。当通过RT-PCR检查小鼠的疤痕表达时，它在包括肺，心脏和肾脏在内的许多组织中表达，并且在大脑和卵巢中尤其高。由于疤痕具有类似于汽车的AD矢量结合位点的主要结构，因此接下来研究了疤痕对AD载体感染的影响。当用疤痕基因转染SK HEP-1细胞并用AD载体感染时，与父菌株相比，感染受到显着抑制。此外，疤痕引入的SK HEP-1细胞的培养上清液显示出AD载体感染的抑制作用。因此，有人提出疤痕可能是抑制AD载体和野生型AD蛋白质的生理感染。为了进一步确认这种可能性，我们目前正在使用大肠杆菌或杆状病毒创建疤痕的重组蛋白，并正在考虑该蛋白质对AD载体感染的影响。

项目成果

Approaches to improve the kinetics of adenovirus delivered gene and gene product.

改善腺病毒传递基因和基因产物动力学的方法。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Adv.Drug.Deli.Rev. 57
• 作者: Xu Z.L.;Mizuguchi H.;Koizumi N.;Sakurai F.;Hosono T.;Kawabata K.;Watanabe Y.;Yamaguchi T.;Hayakawa T.
• 通讯作者: Hayakawa T.