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遺伝子導入マウスを用いたT細胞の機能制御と低酸素での転写因子DEC1の機能解析

转基因小鼠缺氧条件下 T 细胞功能的控制和转录因子 DEC1 的功能分析

基本信息

批准号：
17790193
负责人：
宮崎和子
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790193/
关键词：
T細胞細胞分化トランスジェニックマウス

项目摘要

本年度は、T細胞特異的に発現する転写因子DEC1のトランスジェニックマウス(Tg)を用いて、胸腺内T細胞分化および末梢T細胞におけるDEC1の機能解明を目的として、以下のように実施した。(1)IL-7Rからのシグナル伝達は、T細胞の分化やsurviveなど全般的に作用している必須のものである。IL-7Rの発現は厳密に調節されており、その調節が細胞系列決定や免疫応答の調節に非常に重要な役割を果たしている。本研究により、DEC1 Tgマウスでは胸腺内T細胞分化においてIL-7Rの発現が低下していることが判明した。そこで、IL-7R遺伝子の調節領域をレポーター遺伝子につなぎ、ルシュフェラーゼアッセイを行ったところ、DEC1の強制発現によって転写活性が抑制されることが判明した。(2)DEC1 Tgでは、CD4+/CD62LナイーブT細胞の細胞数が減少している。そこでDEC1がナイーブT細胞にどのように作用しているかを明らかにするために、DEC1 TgからナイーブT細胞を分離し、T細胞受容体(TCR)シグナルによる細胞増殖とサイトカイン(IL-2)の産生を検討した。細胞増殖についてはBrdUの取り込みとCFSEラベル法による分裂回数を検討したところ、DEC1 Tg細胞はコントロール細胞と比較してBrdUの取り込みに差がなく、分裂回数にも差は見られなかった。一方、DEC1 TgCD4+細胞のIL-2産生が著しく減少していることが判明した。さらに、アネキシンV染色によるアポトーシスを検討したところ、DEC1 Tg T細胞においてアポトーシスが亢進していることが判明した。以上の結果から、DEC1は胸腺内T細胞分化においてIL-7R遺伝子発現調節を行うこと、およびナイーブT細胞の維持に関与する事が新たに判明し、本研究結果はT細胞の全ての主要な局面に必要な制御因子であることを初めて示した。

This year, the following activities were carried out in order to clarify the function of DEC1 in T cell differentiation and peripheral T cell differentiation. (1)IL-7R must be activated for its all-round role in T cell differentiation and survival. IL-7R expression is closely regulated, and its regulation is very important in the regulation of cell series that determine immune response. In this study, it was found that the expression of IL-7R in T cells in thymus was decreased. The regulatory domain of IL-7R gene was determined to be the inhibitory domain of IL-7R gene expression. (2) Dec1 Tg decreased, CD4 +/CD62L decreased, and the number of T cells decreased. The role of DEC1 in T cell proliferation and the production of T cell receptor (TCR) and IL-2 are discussed. Cell proliferation, cell division, cell division IL-2 production in DEC1 TgCD4 + cells decreased significantly. In addition to the above, DEC1 Tg T cells can also be used to determine the color of the dye. The above results provide new insights into the regulation of IL-7R gene expression in T cell differentiation in the thymus. The results of this study provide an initial indication of the essential regulatory factors for T cell survival.