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左巻きヘリックス型DNAを認識する脳内蛋白質の探索

寻找识别左手螺旋 DNA 的大脑蛋白质

基本信息

批准号：
09878186
负责人：
米田幸雄
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Setsunan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

真核細胞では、機能蛋白質の生合成は遺伝子転写レベルでの調節を受ける場合が多い。一般的に、遺伝子転写時にはRNAポリメラーゼII上流部の二本鎖DNAに負の超らせん構造が生じ易いので、脳内における信号シグナリング時には、遺伝子上流部に負の超らせんエネルギーに基づく左巻きヘリックス型DNAが出現する確立が高い。さらに、この左巻きヘリックス構造は、DNAの塩基配列がプリン/ピリミジンの交互配列の場合に発生しやすい。したがって、本研究ではプリン/ピリミジン交互配列を有する人工的オリゴヌクレオチドを作成後、放射標識したものをプローブとするゲルシフトアッセイを行った。すなわち、E-box配列(CACGTG)を含む22塩基長のオリゴヌクレオチドを、DNAポリメラーゼIのKlenowフラグメントを用いて[^<32>P]α-ATPにより標識したのち、マウス全脳細胞各抽出液と反応させた、反応液を、ポリアクリルアミドゲル上で電気泳動後、オートラジオグラフィー法により結合プローブを検出した。その結果、同細胞核抽出液中に強いE-box配列認識活性が存在することが判明した。同結合は、非放射性プローブの添加により濃度依存的に阻害されたが、E-box配列にポイントミューティション(CAGGTG)を導入した場合は、結合に対する阻害活性か消失したので、今回検出されたDNA結合能が、E-box配列を特異的に認識する蛋白質に由来することは明らかである。しかしながら、高濃度のMgイオンを添加すると、このDNA結合は著明に阻害された。通常の二本鎖DNAは、右巻きらせん構造である場合が多いのに対して、プリン/ピリミジン交互配列を有する二本鎖DNAの場合は、高濃度Mgイオン存在下では右巻きらせんがほどけて左巻きらせん構造になることを考え合わせると、今回観察されたMgイオンによるDNA結合阻害が、DNAプローブのトポロジー変化に起因する可能性が示唆される。

Eukaryotic cells and organic proteins are produced and synthesized. it is written that there are many genes in the cells. In general, when you write an RNA message, the upstream part of the II uses an ordinary DNA device to create a switch, an internal alarm signal alarm clock, and an overload filter in the upstream part of the cassette to make sure that the DNA is high. This is the first step in the design of the basic configuration of the DNA. In this study, there is an interactive configuration of artificial equipment. After the completion of the work, the radiological tag is known to have been completed. For example, the E-box configuration (CACGTG) contains a 22-year-long base length of 22 years, and the number of DNA files is much higher than that of the previous one. I need to use the following information [^ & lt;32&gt]. P] the alpha-ATP fluid was extracted from the whole body of the body, and the fluid was extracted from the whole body. After the swimming exercise, the combination of the two methods was used. The results showed that there was a strong E-box binding activity in the nuclear extract of the same cell. In the same way as the combination, the addition of the sensitivity-dependent anti-damage protein, the combination of the E-box and the CAGGTG, the combination of the protective activity and the disappearance of the activity, the combination of the DNA binding energy and the specific protein binding energy of the E-box, the origin of the specific protein, the binding energy of the binding energy and the specific binding energy of the protein. In order to improve the performance of the system, the high temperature Mg equipment is used to add the information, and the combination of the DNA is used to show the resistance to the damage. In general, the DNA of an ordinary university, the right part of an ordinary university, the right side of an ordinary university, the right side, the right side, DNA may indicate that the cause is instigated and the cause is not.