癌治療薬探索を目指した新規スプライシングモニタリングシステム構築への挑戦

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本研究はこれまで全く未知であったmRNAのスプライシングに基づく発癌メカニズムを明らかにし、その治療薬を探索するシステムを構築することを目的とする。具体的には多くのヒト癌の悪性化に関与することが判明しているシグナル伝達アダプター分子CRKに焦点をあて転移能の高いCRK-IIへの転換機構を明らかにする。CRKのスプライシングモニタリングシステムを構築し、CRKのスプライシングを制御する機構を分子レベルmicroRNAをスクリーニンし、これまでに全く未知のメカニズムを明らかにする。遺伝子発現は従来転写因子を中心とするエピジェネティックな解析が主流であり近年はmicroRNAが注目されているが、もう1つの重要なメカニズム１つであるスプライシング機構は解明が進んでおらず、疾患との関連、癌との関連では全く深い検討はなされていないのが現状である。今回我々はシグナル伝達アダプター分子CRKがスプライシングバリアントにより機能が異なる点に着目し新規のスプライシングモニタリングシステムを構築するものであり、これまでにない時間空間的なスプライシング情報を得ることができ、正常細胞と癌細胞のスプライシングの差を明確にする画期的なシステムとなることが期待される。本年度の研究においてヒトCRKゲノムをBACクローンより単離してその遺伝子配列を決定した。またCRKゲノムにGFPをN末端とC末端の２つの部分に分けて挿入し、スプライシングが生じるときにGFPの野生型の蛋白が発現するベクターをデザインした。またスプライシングによる生理作用をあらかじめ検討するためにCRK-IとCRK-IIをそれぞれ組み込んだ細胞を作成したところ、CRK-IIはepithelial mesenchymal transitionに積極的に関与することが明らかとなった。今後スプライシングとEMTの関連についても着目して研究を進める。