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アミロイドβペプチドの分解および蓄積過程におけるアミノペプチダーゼAの役割の解明

阐明氨肽酶A在β淀粉样肽降解和积累过程中的作用

基本信息

批准号：
18659025
负责人：
岩田修永
金额：
$ 2.11万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

アミロイドβペプチド(Aβ)の蓄積はアルツハイマー病脳で観察される様々な病理変化の最上流に位置し、進行的な神経細胞の機能障害と脱落の引き金になる。脳内Aβの分解にはネプリライシン(NEP)が主要な働きをするが、これまでの研究によってネプリライシンの活性が低下された時に機能する第二のプロテアーゼとしてアミノペプチダーゼ(APA)が関与する可能性が考えられた。APAはペプチドのアミノ末端のアスパラギン酸やグルタミン酸残基の切断を行うプロテアーゼであり、in vitroでAPAがAβ分解活性を有することを確認している。1)APAは脳内NEPと協調的に働いて効率よくAβを分解するか、逆に2)AD脳の主要蓄積型Aβ、Aβ3pyroE-42の産生へ関与し、AD病理を加速するように機能することが推定された。今年度までに得られた結果は下記の通りである。(1)APA単独の欠損マウス(若週齢)では脳内Aβの総量の変化は認められなかったが、NEPおよびAPA二重欠損マウス(若週齢)では、NEP単独の欠損マウスに比較し可溶性画分のAβ量が低下することを見出した。但し、不溶性画分のAβ量は変化していなかった。(2)NEPおよびAPA二重欠損マウス脳に存在するAβのN末端解析を行うため、このマウスにAPP tgマウスをさらに交配させた。若週齢(9週)マウスから脳を摘出し、ELISAおよびウエスタンブロットによりAβのN末端の構造解析(N末端インタクト型および3pyroE型)を行ったが、APAの単独欠損型、NEP単独欠損型および両者に対する野生型に比較して顕著な変化は見られず、Aβの総量についても顕著な差異は検出されなかった。加齢に伴うAβの蓄積速度やN末端の構造変化について検討するため、現在、24ヶ月齢のこれらのマウスから脳を摘出し、生化学解析用の凍結脳、組織化学解析用のパラフィン切片を調製している。

アミロイド beta ペプチド (A beta) の accumulation はアルツハイマー disease 脳で観 examine される others 々な pathological variations しの most polite に position, the なの経 cells function handicap of god fall off との led き gold になる. 脳 within A beta の decomposition にはネプリライシン (NEP) が main な働きをするが, これまでの research によってネプリライシンの active low がされたに function when する second のプロテアーゼとしてアミノペプチダーゼ (APA) が masato and する possibility が exam えられた. APA はペプチドのアミノ end のアスパラギン acid やグルタミン acid residues の cut off line をうプロテアーゼであり, the in vitro で APA が A beta を decomposition activity have することを confirm している. 1) APA は脳 within the NEP と coordinated に働いて sharper rate よく A beta を decomposition するか, 2) inverse に AD 脳の main accumulation type A beta, A beta 3 pyroe - 42 の produce へ masato and し, AD pathology を accelerated するように function することが presumption された. The られた results obtained from までに for this year are denoted as であるである below. (1) the APA 単 alone の owe loss マウス (if weeks 齢) では脳 within A beta の総 quantity の variations change は recognize められなかったが, NEP および APA double owe loss マウス (if weeks 齢) では, NEP 単 alone の owe loss マウスに compare し soluble draw points の A low amount of beta がすることを shows した. However, the <s:1> and insoluble fraction of the <s:1> Aβ quantity った changes ててななったったった. (2) the NEP および APA double owe loss マウス脳に exist する A beta の N terminal line analytical をうため, このマウスに APP tg マウスをさらに mating させた. If weeks 齢 (9 weeks) マウスから脳を pick out し, ELISA およびウエスタンブロットにより A beta の N terminal の structure (N terminal インタクト type および pyroe type 3) line をったが, APA の単 owe loss alone, the NEP 単 owe loss alone および struck the にす seaborne る wild-type に compare して顕 the な variations change は see られず, A beta の総 quantity についても顕な difference between は検 out されなかった. Add 齢に with う A beta の accumulation speed や N terminal の structure - the について beg す検るため, now, 24 ヶ month 齢のこれらのマウスから脳を pick the し, biochemical analytic with freezing の脳, histochemistry parse with のパラフィン slice を modulation している.