酵母転写因子GAL11と基本因子TFIIEの相互作用

酵母转录因子GAL11与碱性因子TFIIE之间的相互作用

• 批准号: 08780661
• 负责人: 桜井 博
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08780661/
• 关键词: 酵母; 基本転写因子; 転写制御

酵母の転写補助因子GAl11は、RNA polymeraseIIや他の転写因子と複合体(RNAPII holoenzyme)を形成し、遺伝子の基礎転写や転写活性化に関与している。申請者は、GAl11は基本転写因子TFIIEと結合することにより、遺伝子の基礎転写の調節に関与していることを明らかにした(PNAS93:9488-9492)。本研究では、RNAPII holoenzymeにおけるGal11の機能に注目し、以下のことを明らかにした。1)Gal11とTFIIEの相互作用 TFIIEの温度感受性変異株を分離し解析した結果、GaL11と同様の遺伝子特異的な作用を示した(FEBS Lett.398:113-119,論文投稿中)。また、protein affinity chromatographyによりGal11と結合するTFIIEの領域を決定した。この結果に基づいて、Gal11と結合しないTFIIE変異酵母株を作製した。この変異株はgal11欠失株と同じ表現形を示した。また、無細胞転写系で検討した結果、Gal11による転写促進にはTFIIEとの結合が必須であることが明らかになった。この結果より、Gal11はTFIIEを介して転写調節を行うことが示された。(論文作成中)。2)Gal11とholoenzymeの結合 Gal11の様々な領域の欠失変異遺伝子を酵母内に導入し、holoenzymeとの結合領域を免疫沈殿法による解析を試みたが、Gal11のC末端側が結合に必要であることが他のグループにより報告された(Farrell et al.,Genes Dev.10:2359-2367)。3)Gal11と結合する転写因子の検討 Gal11が他の基本転写因子とも相互作用するかについて検討した結果、C末端付近でTFIIHに結合することが明らかになった。TFIIHはkinase,ATPase,helicase活性を持っており、ヒトではこの活性がTFIIEにより制御されているので、Gal11-TFIIE-TFIIHの相互作用について解析した。その結果少なくともkinase活性はGal11により促進された(未発表)。これらの研究より基礎補助因子のGal11は、TFIIE,TFIIHと相互作用することにより遺伝子の転写を制御することが示唆された。しかし、なぜGal11とTFIIEの遺伝子特異的な作用を示すのか、また、その機構についてTFIIHがどのように関与しているかについては今後の課題である。

Yeast の planning write subsidy factor GAl11 は, RNA polymeraseII や he の planning write factor と complex (RNAPII holoenzyme) を form し based planning to write, but 伝 の や planning write activeness に masato and し て い る. Applicants は, GAl11 は basic planning write factor TFIIE と combining す る こ と に よ り based planning to write, but 伝 の の adjust に masato and し て い る こ と を Ming ら か に し た (PNAS93:9488-9492). This study で は, RNAPII holoenzyme に お け る Gal11 に attention し の function, the following の こ と を Ming ら か に し た. 1)Gal11とTFIIE <s:1> interaction TFIIE <s:1> temperattion-sensitive variant を isolation <s:1> analysis <e:1> た results, GaL11と similar artifact 伝 specific な interaction を shows た(FEBS Lett.398:113-119, paper submission in progress). Youdaoplaceholder0, protein affinity chromatographyによ によ Gal11と in combination with するTFIIE <s:1> domain を determine た た. The <s:1> <s:1> results were obtained by combining に base づ づ て て with Gal11と and <s:1> な を TFIIE variant yeast strain を to produce た. The <s:1> mutant strain じ gal11 deficient strain と and じ exhibit the same form を as じ た. ま た, no cell planning write で beg し 検 た results, Gal11 に よ る planning write promote に は TFIIE と の must combine が で あ る こ と が Ming ら か に な っ た. <s:1> the result of よ よ, Gal11 を TFIIEを and <s:1> て転 write the adjusting を line う とが とが とが shows された. (The thesis is being completed.) 2)Gal11とholoenzyme binds の owe Gal11 の others 々 な field loss - different heritage 伝 を に import し in yeast, holoenzyme と の combined with field を immune Shen Dian method に よ る parsing を try み た が, Gal11 の C terminal side が combining に necessary で あ る こ と が he の グ ル ー プ に よ り report さ れ た (Farrell et al., Genes Dev.10:2359-2367. 3) Gal11 と combining す る planning write factor の beg Gal11 検 が he wrote の basic planning factor と も interaction す る か に つ い て beg し 検 た results, C ends pay nearly で TFIIH に combining す る こ と が Ming ら か に な っ た. TFIIH は kinase, ATPase, helicase activity を っ て お り, ヒ ト で は こ の active が TFIIE に よ り suppression さ れ て い る の で, Gal11 TFIIE - TFIIH の interaction に つ い て parsing し た. Youdaoplaceholder0 そ results a reduction in なくと なくと kinase activity そ Gal11によ <e:1> promotes された(not shown). こ れ ら の research よ り based subsidy factor の Gal11 は, TFIIE TFIIH と interaction す る こ と に よ り heritage 伝 son の planning write を suppression す る こ と が in stopping さ れ た. し か し, な ぜ Gal11 と TFIIE の heritage 伝 child specific を な role す の か, ま た, そ の institutions に つ い て TFIIH が ど の よ う に masato and し て い る か に つ い て は の topics in future で あ る.

项目成果

桜井博、深沢俊夫: "酵母転写因子GAL11と基本転写因子の相互作用" 転写因子-生物機能調節の要-蛋白質核酸酵素(共立出版). 41. 1178-1186 (1996)

Hiroshi Sakurai、Toshio Fukazawa：“酵母转录因子 GAL11 和基本转录因子之间的相互作用”转录因子 - 调节生物功能的关键 - 蛋白质核酸酶（Kyoritsu Shuppan）（Kyoritsu Shuppan）。

Sakurai,H.,et al.: "Core promoter elements are essential as selective determinants for function of the yeast transcription factor GAL11." FEBS Letters. 398. 113-119 (1996)

Sakurai, H., et al.：“核心启动子元件作为酵母转录因子 GAL11 功能的选择性决定因素是必不可少的。”

Sakurai,H.,et al.: "The yeast GAL11 protein binds to the transcription factor IIE through GAL11 regions essential for its invivo function." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 93. 9488-9492 (1996)

Sakurai, H., et al.：“酵母 GAL11 蛋白通过对其体内功能至关重要的 GAL11 区域与转录因子 IIE 结合。”

深沢俊夫、桜井博: "酵母における転写制御機構の研究-高等真核生物のモデル系として-" 日本医真菌学会雑誌. 37. 9-14 (1996)

Toshio Fukazawa、Hiroshi Sakurai：“酵母转录控制机制的研究 - 作为高等真核生物的模型系统”日本医学真菌学会杂志 37. 9-14 (1996)。