系列特異的細胞消去法を応用した免疫細胞の生体内機能解析

使用谱系特异性细胞消除方法对免疫细胞进行体内功能分析

• 批准号: 18659109
• 负责人: 烏山 一
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659109/
• 关键词: 好塩基球; トランスジェニックマウス; 相同組み換え; ジフテリア毒素; 緑色蛍光色素; 系列特異的細胞消去

系列特異的細胞消去法による免疫細胞の機能解析のシステムを立ち上げるためのモデルスタディとして、これまで機能解析がほとんど進んでいない好塩基球を標的とした好塩基球欠損マウスの樹立を目標に研究を進めた。前年度の研究で、BACクローン上で相同組み換え技術を応用して、好塩基球特異的に発現しているプロテアーゼmMCP-8をコードする遺伝子の蛋白コード領域をジフテリア毒素遺伝子あるいは緑色蛍光色素(GFP)遺伝子に置換したコンストラクトを作製した。本年度は、緑色蛍光色素遺伝子に置換したコンストラクトをマウス受精卵に導入し、BACトランスジェニックマウスの樹立を試みた。生まれてきた子マウスの尾DNAの解析から、低頻度ながら、BAC由来遺伝子が組み込まれた子マウス数匹を得た。それらのマウスの末梢血をフローサイトメトリーで解析したところ、いずれのマウスにおいてもCD49b陽性FcεRI陽性の好塩基球におけるGFPの発現が確認されなかった。そこで、mMCP-8遺伝子を含む別のBACクローンを用いて、GFP置換コンストラクトを作製しなおした。このコンストラクトをin vitroでマウス骨髄細胞に導入したところ、好塩基球特異的にGFPが発現されることが確認された。そこでこのコンストラクトをマウス受精卵に導入したところ、生まれてきた子マウスの一部で、末梢血中の好塩基球におけるGFPの発現が確認された。現在、この好塩基球GFP陽性マウスの子孫を育成中であり、これらのマウスで好塩基球特異的なGFP発現が再度確認されれば、GFPの代わりにジフテリア毒素遺伝子を組み込んだBACコンストラクトを作製して、マウス受精卵に導入する予定である。

Series of specific cell elimination に よ る function of immune cells の parsing の シ ス テ ム を stand on ち げ る た め の モ デ ル ス タ デ ィ と し て, こ れ ま で function analytical が ほ と ん ど into ん で い な い good salt base ball を mark と し た good salt base ball owe loss マ ウ ス の を aim を に research into め た. Before the annual の research で, BAC ク ロ ー ン み で the same group in え technology を 応 with し て, good salt base ball specific に 発 now し て い る プ ロ テ ア ー ゼ mMCP - 8 を コ ー ド す る heritage 伝 son の protein コ ー ド field を ジ フ テ リ ア toxin heritage 伝 son あ る い は 蛍 light green pigment (GFP) heritage 伝 son に replacement し た コ ン ス ト ラ ク ト を cropping し た . This year は 蛍 light, the green pigment heritage 伝 son に replacement し た コ ン ス ト ラ ク ト を マ ウ ス fertilized egg に import し, BAC ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス の set を try み た. Son born ま れ て き た マ ウ ス の tail DNA の parsing か ら, low frequency な が ら group, BAC origin but 伝 が み 込 ま れ た son マ ウ ス several horse を た. そ れ ら の マ ウ ス を の peripheral blood フ ロ ー サ イ ト メ ト リ ー で parsing し た と こ ろ, い ず れ の マ ウ ス に お い て も CD49b positive Fc epsilon RI positive の good salt base ball に お け る GFP の 発 が now confirmed さ れ な か っ た. そ こ で, mMCP - 8 but 伝 を containing む don't の BAC ク ロ ー ン を with い て, GFP replacement コ ン ス ト ラ ク ト を cropping し な お し た. こ の コ ン ス ト ラ ク ト を in vitro で マ ウ ス bone marrow cells に import し た と こ ろ, good salt base ball specific に GFP が 発 now さ れ る こ と が confirm さ れ た. そ こ で こ の コ ン ス ト ラ ク ト を マ ウ ス fertilized egg に import し た と こ ろ, raw ま れ て き た son マ ウ ス の で, peripheral blood の good salt base ball に お け る GFP の 発 が now confirmed さ れ た. Now, こ の good salt base ball GFP positive マ ウ ス の sons を bred in で あ り, こ れ ら の マ ウ ス で good salt base ball specific な GFP 発 が now again confirm さ れ れ ば, GFP の generation わ り に ジ フ テ リ ア toxin heritage 伝 son を group み 込 ん だ BAC コ ン ス ト ラ ク ト を cropping し て, マ ウ ス fertilized egg に import す る designated で あ る.

项目成果

好塩基球による新たな慢性アレルギー炎症誘発機構

嗜碱性粒细胞诱导慢性过敏性炎症的新机制

• 发表时间: 2006
• 期刊: 感染・炎症・免疫 36:1
• 作者: Yamagishi SI;Ogasawara S;Mizukami H;Yajima N;Wada RI;Sugawara A;Yagihashi S.;烏山 一
• 通讯作者: 烏山 一

好塩基球に選択的に発現する穎粒酵素に対する特異抗体の樹立とその応用

嗜碱性粒细胞选择性表达的粟粒状酶特异性抗体的建立及其应用

• 发表时间: 2007
• 作者: 宇賀神つかさ;小島利之;小畑一茂;辻村祐佑;向井香織;河野洋平;峯岸克行;烏山一
• 通讯作者: 烏山一

好塩基球が主役を演じる慢性アレルギー炎症

嗜碱性粒细胞起主导作用的慢性过敏性炎症

• 发表时间: 2009
• 期刊: アレルギー・免疫
• 作者: 向井香織;烏山一
• 通讯作者: 烏山一

Novel mechanism of chronic allergic inflammation; pivotal role of basophils.

慢性过敏性炎症的新机制；

• 发表时间: 2007
• 作者: 向井香織;烏山 一;烏山 一;烏山 一;Karasuyama H.
• 通讯作者: Karasuyama H.

Basophils play a pivotal role in immunoglobulin G-but not immunoglobulin E-mediated systemic anaphylaxis.

嗜碱性粒细胞在免疫球蛋白 G 介导的全身过敏反应中发挥关键作用，但在免疫球蛋白 E 介导的全身性过敏反应中则不然。

• 发表时间: 2008
• 期刊: Immunity (印刷中)
• 作者: Tsujimura;Y.;Obata;K.;Mukai;K.;Shindou;H.;Yoshida;M.;Nishikado;H.;Kawano;Y.;Minegishi;Y.;Shimizu;T. and Karasuyama;H.
• 通讯作者: H.