FACSを利用した新規なタンパク質機能モチーフ探索法の開発

使用 FACS 开发新型蛋白质功能基序搜索方法

• 批准号: 19657044
• 负责人: 前濱 朝彦
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19657044/
• 关键词: タンパク質分解; ランダム変異

本研究では、ランダム変異導入とFACSソーティングを組み合わせて蛋白質の機能モチーフをスクリーニングする手法の開発を目的とし、癌抑制因子PICT-1を題材として、その細胞内動態(ストレス依存性の分解および核小体局在)を制御する機能モチーフの同定およびその生理的意義の解明を試みた。まずPICT-1の核小体移行を制御する機能モチーフのスクリーニングにおいては、PICT-1蛋白質上の複数部位が細胞内局在決定に関与する可能性を見いだした。さらにPICT-1のN末端側およびC末端側の双方共に核小体への局在を示すことが明らかとなり、それぞれの領域における核小体移行モチーフの同定を試みたが、本法で用いたRUBY法プローブであるPICT-1BP1が、分割したPICT-1とは結合しないことが明らかとなり、異なるプローブを用いた新規スクリーニング法が必要となった。続いて、PICT-1の分解を制御する機能モチーフのスクリーニングを行ったが、本スクリーニングにおいても少なくとも三カ所以上の複数部位が分解制御に関与する可能性を見いだした。またPICT-1をN末端側とC末端側の二つに分割した場合、どちらの領域もストレス応答性の分解を受けることが明らかとなった。さらにPICT-1分解がアポトーシス誘導剤を中心とした様々なストレス誘導剤によって起こること、またこの分解がUBE1非依存性であることを見いだした。プロテアーゼ阻害剤を用いた解析からは、この分解がMG132感受性かつカテプシンB/D非依存性であることが明らかとなった。以上の結果から、PICT-1は強いストレスによって構造的な制御を失ったプロテアソーム酵素群によって分解されている可能性が示された。

This study で は, ラ ン ダ ム - different import と both FACS ソ ー テ ィ ン グ を group み close わ せ て protein の function モ チ ー フ を ス ク リ ー ニ ン グ す る gimmick の open 発 を purpose と し, cancer suppressor を PICT - 1 subject と し て, そ の intracellular dynamic (ス ト レ ス dependency の decomposition お よ び in nucleosome bureau) を suppression す る function モ チ ー フ の To clarify the physiological significance of およびそ, try みた. ま ず PICT 1 の nucleosome transitional を suppression す る function モ チ ー フ の ス ク リ ー ニ ン グ に お い て は, PICT 1 protein on の bureau in determining plural parts が cell に masato and す る を likely see い だ し た. の さ ら に PICT - 1 N terminal side お よ の び C terminal side that the に nucleosome へ の bureau at を す こ と が Ming ら か と な り, そ れ ぞ れ の field に お け る nucleosome transitional モ チ ー フ の with fixed を try み た が, this law で い た RUBY method プ ロ ー ブ で あ る PICT 1 bp1 が, segmentation し た PICT 1 と は combining し な い こ と が Ming ら か と な り, different な る プ ロ ー ブ を with い た new rules ス ク リ ー ニ ン グ method が necessary と な っ た. 続 い て, PICT 1 の decomposition を suppression す る function モ チ ー フ の ス ク リ ー ニ ン グ を line っ た が, this ス ク リ ー ニ ン グ に お い て も less な く と も three カ so の plural parts が decomposition suppression に masato and す る を likely see い だ し た. を ま た PICT - 1 N terminal side と C terminal side の two つ に segmentation し た occasions, ど ち ら の field も ス ト レ ス 応 a sexual の decomposition を by け る こ と が Ming ら か と な っ た. さ ら に PICT 1 decomposition が ア ポ ト ー シ ス induced tonic を center と し た others 々 な ス ト レ ス induced tonic に よ っ て up こ る こ と, ま た こ の decomposition が UBE1 non dependency で あ る こ と を see い だ し た. プ ロ テ ア ー ゼ resistance against tonic を い た parsing か ら は, こ の decomposition が MG132 susceptibility か つ カ テ プ シ ン B/D of dependency で あ る こ と が Ming ら か と な っ た. の above results か ら, PICT 1 は い ス ト レ ス に よ っ て structure of royal を lose な system っ た プ ロ テ ア ソ ー ム enzyme group に よ っ て decomposition さ れ て い が る possibility in さ れ た.

项目成果

PTEN: Its deregulation and tumorigenesis

• DOI: 10.1248/bpb.30.1624
• 发表时间: 2007-09-01
• 期刊: BIOLOGICAL & PHARMACEUTICAL BULLETIN
• 影响因子: 2
• 作者: Maehama, Tomohiko

RalA functions as an indispensable singnal mediator for the untrient-sensing system

RalA 作为无动力传感系统不可或缺的信号中介

• 发表时间: 2008
• 期刊: Journal of Biological Chemistry 283
• 作者: Maehama;T.
• 通讯作者: T.

S1P2 receptors mediate inhibition of glioma cell migration through Rho signaling pathways independent of PTEN

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2007.12.054
• 发表时间: 2008-02-22
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Malchnkhuu, Enkhzol;Sato, Koichi;Okajima, Fumikazu
• 通讯作者: Okajima, Fumikazu

Identification of a Ras-family GTPase as an indispensable signal mediator for nutrient sensing and mTORC1 activation

鉴定 Ras 家族 GTPase 作为营养传感和 mTORC1 激活不可或缺的信号介质

• 发表时间: 2008
• 作者: Maehama;T.
• 通讯作者: T.

あらたな癌抑制遺伝子PICT-1/GLTSCR2

新抑癌基因PICT-1/GLTSCR2

• 发表时间: 2008
• 期刊: 医学のあゆみ 224
• 作者: Malchinkhuu;E.;前浜 朝彦
• 通讯作者: 前浜 朝彦