遺伝子導入ES細胞を用いたマウス胚初期発生におけるサイトカインの役割の研究

使用转基因 ES 细胞研究细胞因子在小鼠早期胚胎发育中的作用

• 批准号: 05807010
• 负责人: 新井 賢一
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05807010/
• 关键词: ES(胚幹)細胞; 遺伝子導入; サイトカイン; レセプター; LIF; 6M-CSF; IL-3; Id

1)LIF遺伝子導入ES細胞ES細胞3A-1にmouse LIF cDNAを安定導入し、LIF高発現クローンおよび低発現クローンを得た。高発現クローンはLIF非添加で培養してもES細胞の分化は起こらなかったが、低発現クローンはLIF非添加で培養することにより分化が誘導された。これはLIFがオートクラインに働いてES細胞の分化を阻害しうることを示している。LIF低発現および高発現クローンをblastocystにインジェクションしキメラマウスの作成を試みた。高発現クローンからはキメラマウスは得られなかったが、低発現クローンからはキメラマウスが得られ、LIFはin vivoでも初期胚の分化を阻害しないことが示唆された。このキメラマウスは下腹部に高頻度に腫瘍を発生し、生後数週間で死に至った。病理学的解析により、腫瘍はテラトーマであることが明らかになった。2)ヒトGM-CSFレセプター遺伝子導入ES細胞ヒトGM-CSFレセプターα,β鎖cDNAを導入し、発現するES細胞を構築した。このES細胞はヒトGM-CSFによりわずかに細胞増殖が促進され、MAPキナーゼリン酸化が誘導された。しかしヒトGM-CSFによりLIFのような分化抑制効果は認められなかった。現在これらのクローンを用いてGM-CSFとLIFの細胞内シグナル伝達経路の解析を行なっている。3)Id遺伝子導入ES細胞Idはb-HLHタンパク質と相互作用をすることにより分化抑制に関与していることがいくつかの系で報告されている。ES細胞の分化調節に対するIdの影響を検討した。LIF非添加培地で分化誘導するとId1,2,3いずれのmRNAレベルも一過性の低下を示し、その後もとのレベルに復した。次いでId1 cDNAを導入し、高発現したES細胞を作成した。これらのES細胞はLIF非添加培地で分化が誘導された。現在、これらのクローンを用いてLIFの分化抑制シグナルとIdの関連を解析している。

1)LIF cDNA was introduced into ES cells 3A-1 and mouse LIF cDNA was stably introduced into ES cells 3A-1. LIF high expression and low expression were obtained. The differentiation of ES cells was induced by LIF in culture without addition of LIF in high level and in culture without addition of LIF in low level. This is the first time that the LIF has been shown to inhibit ES differentiation. LIF low level and high level High level of development, low level of development, low level of development, A high frequency of swelling occurs in the lower abdomen, and occurs in the weeks following birth. Pathological analysis, swelling, swelling, swelling 2) The GM-CSF cDNA was introduced into ES cells, and the GM-CSF cDNA was introduced into ES cells to construct ES cells. These ES cells are stimulated by GM-CSF and induced by MAP. GM-CSF is the most effective way to differentiate and inhibit the growth of plants. Now, we can use GM-CSF and LIF to analyze the intracellular pathway of GM-CSF. 3)Id gene introduced into ES cells Id b-HLH gene interaction and differentiation inhibition related to the study of Id b-HLH gene expression. To investigate the effect of Id on ES cell differentiation regulation LIF is not added to the culture medium to induce differentiation. Id1,2,3 contain mRNA that is transiently low in expression, and subsequently low in expression. The cDNA of Id1 was introduced into ES cells, and ES cells were produced with high efficiency. The ES cells were induced to differentiate in LIF unsupplemented culture. Now, the relationship between LIF and Id is analyzed.

项目成果

Masuda E.S.: "The GM-CSF promoter cis acting element CLEO mediates induction signals in T cells and is recognized by factors related to AP_1 and NF-AT" Mol.Cell.Biol.13. 7399-7407 (1993)

Masuda E.S.：“GM-CSF 启动子顺式作用元件 CLEO 介导 T 细胞中的诱导信号，并被 AP_1 和 NF-AT 相关因子识别”Mol.Cell.Biol.13。

Tomoda T.: "Molecular cloning of mouse counterpart for human TGFβ type I receptor" B.B.R.C.in press. (1994)

Tomoda T.：“人 TGFβ I 型受体的小鼠对应物的分子克隆”B.B.R.C. 出版（1994 年）。

Watanabe S.: "Reconstituted human GM-CSF receptor transduces growth promoting signals in mouse NIH 3T3 cells:Comparison with signalling in BNF3 pro B cells" Mol.Cell.Biol.13. 1440-1448 (1993)

Watanabe S.：“重建的人类 GM-CSF 受体在小鼠 NIH 3T3 细胞中转导生长促进信号：与 BNF3 pro B 细胞中的信号传导比较”Mol.Cell.Biol.13。

Nakagawa Y.: "Structure of the gene encoding the α subunit of the human GM-CSF receptor" J.Biol.Chem.in press. (1994)

Nakakawa Y.：“编码人类 GM-CSF 受体 α 亚基的基因的结构”J.Biol.Chem.in press（1994）。

Sato N.: "Signal transduction by the high affinity GM-CSF receptor:two distinct cytoplasmic domains of the common β subunit responsible for different signalling" EMBOJ.12. 4181-4189 (1993)

Sato N.：“高亲和力 GM-CSF 受体的信号转导：共同 β 亚基的两个不同的细胞质结构域负责不同的信号传导”EMBOJ.12 4181-4189 (1993)。