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強力なカフェイン感受性チャンネル開口薬MBEDを用いたCa遊離チャンネルの研究

使用 MBED（一种强效咖啡因敏感通道开放剂）研究 Ca 释放通道

基本信息

批准号：
04263203
负责人：
大泉康
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

今回、MBED結合蛋白質に特異的に反応するモノクローナル抗体の作成を試み、更に中枢においても見いだされたMBED結合部位に生化学的性質について報告する。可溶化したウシ大動脈平滑筋ミクロソーム画分をイオン交換カラムクロマトグラフィー(Q-Sepharose HP)に付した。カラムから2つの^3H-MBED結合活性に主ピークが溶出された。この二つのピークには67kDaと58kDaの蛋白バンドが各々含まれていた。これらの蛋白バンドはこれまでの精製の過程で^3H-MBED結合活性と挙動を共にしており、活性に関与すると考えられる。また分子量などを考慮すると、リアノジン結合蛋白質とは明らかに異なる蛋白質であった。この二つのピークを各々抗原としてモノクローナル抗体の作成を行ない、ELISA、イムノブロットでスクリーニングし、既に4クローンを樹立した。現在これらの抗体を用いて^3H-MBED結合活性の免疫沈降、 ^3H-MBED結合蛋白質の同定並びに抗体カラムによる^3H-MBED結合蛋白質の精製を検討中であり、MBED結合蛋白質の精製が効率よく進展すると期待される。中枢神経でも細胞内Ca^<2+>貯蔵部位のCa^<2+>遊離が細胞内情報伝達機構において重要な位置を占めている。また、Ca^<2+>遊離剤のカフェインは重要な中枢興奮薬でもあるが、その作用部位に関する分子レベルの研究は全く進展していない。そこで中枢神経においても^3H-MBED結合活性について検討した結果、モルモット大脳ミクロソーム画分には骨格筋、平滑筋とほぼ同等の結合活性が見られた。この結合蛋白質は、その結合活性の精製段階での挙動からして、リアノジンやIP_3各結合蛋白質とは明らかに異なり、また平滑筋のMBED結合蛋白質とも異なる点が多く見られたので、これらはアイソプロテインに可能性が考えられる。現在その結合蛋白質の精製を進めている。

In this paper, MBED binding protein specific reaction, the preparation of antibodies, more central to see the MBED binding site biochemical properties of the report. Solubility of the system smooth muscle, soft tissue, soft tissue H-MBED binding activity is mainly due to dissolution. These two proteins are 67kDa and 58kDa in size. The purification process of this protein is the study of the interaction between H-MBED binding activity and activity. The molecular weight of the protein is different from that of the protein. These two types of antigens are used to create antibodies, ELISA, and other methods. The present study is aimed at improving the efficiency of purification of ^3H-MBED binding proteins by immunoprecipitation, identification of ^3H-MBED binding proteins, and purification of ^3H-MBED binding proteins. Ca ^<2 +> free from intracellular Ca ^<2 +> storage sites in the central nervous system occupies important positions in intracellular information transmission mechanisms. The molecular structure of Ca~(2 +) and Ca~(2 +) ions is important for central excitation. The binding activity of H-MBED in the central nervous system was studied. The binding activity of H-MBED in the central nervous system was studied. The binding protein has different binding activity and different binding activity. The binding protein has different binding activity and different binding activity. The binding protein has different binding activity. Now, the purification of binding proteins is progressing.