GABAシナプスにおけるカルシウム結合蛋白、レセプター及びトランスポーターの解析

GABA 突触中钙结合蛋白、受体和转运蛋白的分析

• 批准号: 04267219
• 负责人: 小坂 俊夫
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04267219/
• 关键词: GABA; カルシウム結合蛋白; Purkinje cell; 小脳; 免疫細胞化学; 定量解析

神経細胞内でのカルシウム結合蛋白parvalbuminPVの局在を明らかにするため小脳のPurkinje細胞をモデルとして選び、コロイド金(直径15nm)標識二次抗体を用いた、いわゆるコロイド金免疫電顕を行なった。直接倍率1万倍で撮影し、写真上でPurkinje細胞及び他の細胞の各部位を同定し、単位面積(1mm^2)当たりのコロイド金粒子数を測定した。コロイド金免疫電顕におけるコロイド金密度と抗原密度との相関について調べる目的で、既知量のPVを含有している標準試料を作製した。ラットの筋肉からHPLCを用いてPVを精製し、牛血清アルブミンに一定量の精製PVを溶解し、固定液(グルタールアルデヒド)を混合して固定した。固定した標準試料は脳組識と全く同様の方法でLowicry1樹脂包理し、電顕レベルでの包理後免疫細胞化学を行なった。コロイド金密度(粒子数/μm^2)は細胞体及び樹状突起で15-20、軸索及び軸索終末50-60であり、明らかに細胞内におけるPVの濃度差があった。速筋であるm.gastronemiusでは生化学的解析により細胞内のPV濃度が300-550μMと推定されるがコロイド金免疫電顕でのコロイド金密度をPV標準試料のCalibration curveで検討したところ筋内PV濃度は400μMであると推定された。このことからPV標準試料のCalibration curveが一般の生物試料に適用できることが明らかになった。これに基づいてPV濃度を細胞体樹状突起では50-100μM、軸索及び終末部では1-2mMであろうと推定した。PVは小脳Purkinje細胞内分布での解析から、ニューロンの出力部である軸索及び軸索終末により高濃度存在していることが示唆された。このことはPVの発現が発生的にはニューロンの成熟と平行して増加してくることも含めて、その機能を考える上で重要な意味を有していると思われる。

The protein parvalbuminPV binding protein in neurons is present in Purkinje cells. The protein (15nm in diameter) identifies secondary antibodies and is used to immunize cells. Direct magnification of 10,000 times was used to measure the number of gold particles in Purkinje cells and other cells. For the purpose of adjusting the density of gold and antigen, the standard sample with known amount of PV was prepared. HPLC is used to purify the protein, dissolve a certain amount of purified PV in bovine serum, and mix and fix the fixing solution. The standard samples were fixed and identified by the same method. Lowicry1 resin coating, electroporation and post-coating immunocytochemistry were performed. The density of PV (particles/μm^2) in cell bodies and dendrites is 15-20, axons and axonal terminals are 50-60, and the concentration difference in intracellular PV is 15 - 20. The concentration of PV in cells was estimated to be 300-550μM by biochemical analysis. The concentration of PV in cells was estimated to be 400μM by Calibration curve of PV standard samples. The Calibration curve of PV standard sample is applicable to general biological sample. The concentration of PV in basal cells was 50-100μM in dendrites, 1-2mM in axons and terminals. The intracellular distribution of PV in Purkinje cells was analyzed, and the axons and axonal terminals were found in high concentrations. The development of PV is a matter of maturity and parallel growth. It contains functions and is important to the development of PV.

项目成果

T.KOSAKA: "Monoclonal antibody473selectively stains a subpopulation of GABA ergic neurons containing the calcium-binding protein parvalbumin in the rat cerebral cortex." Experimental Brain Research. 89. 104-114 (1992)

T.KOSAKA：“单克隆抗体 473 选择性地对大鼠大脑皮层中含有钙结合蛋白小清蛋白的 GABA 能神经元亚群进行染色。”

J.Q.REN: "Quantitative analysis of neurons and glial cells in the rat somatosensory cortex,with special reference to GABA ercic neurons and parvalbumin-containig neurons." Experimental Brain Research. 92. 1-14 (1992)

J.Q.REN：“大鼠体感皮层神经元和神经胶质细胞的定量分析，特别是 GABA 神经元和含有小清蛋白的神经元。”

T.KOSAKA: "Axons and axon terminals of cerebellar Purkinje cells and basket cessl have higher levels of parvalbumin immunoreactivity than somata and dendrites:quantitative analysis by immunogbld labeling." Experimental Brain Research.

T.KOSAKA：“小脑浦肯野细胞和篮子细胞的轴突和轴突末端比体细胞和树突具有更高水平的小清蛋白免疫反应性：通过免疫球蛋白标记进行定量分析。”

T.KOSAKA: "Chemically defined subpopulations of cortical GABA ergic neurons." Neuroscience. 18. 51-59 (1992)

T.KOSAKA：“化学定义的皮质 GABA 能神经元亚群。”

K.KOSAKA: "Postnatal X-ray irradiation effects in glimerular layer of rat olfactory bulb:quantitative and immunocytichemmical and lysis." Experimental Brain Research. 90. 103-115 (1992)

K.KOSAKA：“出生后 X 射线照射对大鼠嗅球神经小球层的影响：定量、免疫细胞化学和裂解。”