课题基金 / 基金详情

胚幹細胞への欠失変異導入法の開発

胚幹細胞への欠失変異導入法の開発
胚胎干细胞缺失突变导入方法的开发
批准号：
05275204
负责人：
宮崎 純一
金额：
$2.56万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1993 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05275204/
关键词：
胚幹細胞ジーンターゲッティング変異導入

项目摘要

项目成果

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中文摘要
翻译
マウス胚幹(ES)細胞を用いたジーンターゲッティング法により、さまざまな遺伝子を欠損したマウスの作製が報告され、遺伝子の個体レベルでの機能の研究に大きな成果をあげている。ジーンターゲッティング法のため、DNAをES細胞に導入したとき、neo遺伝子がそれを挟む両側の配列で染色体DNAと相同組み換えを起こして取り込まれたES細胞クローンを選択することになる。このとき、2つの相同配列の間の距離は1〜2kb程度のDNAや挿入や欠失によっては、相同組み換えの効率に影響を与えないようである。さらに長い距離でも相同組み換えが可能なら、染色体上の離れた相同配列でneo遺伝子を挟み込んだDNAを作製し、ES細胞に導入し、相同組み換えを起こしたクローンを選択することにより、2つの相同配列の間にある複数の遺伝子を含む領域の欠失を引き起こすことも可能になると考えられる。本研究では、2つの相同配列の長さとその間の距離と相同組み換えの起こる頻度との関係をES細胞を用いて詳しく検討することにより、ジーンターゲッティングの技術を特定の染色体領域の欠失に応用できるかを評価することである。今年度はまずc-mpl遺伝子を対象に一般的なターゲッテイングを行い、方法の改良を行った。ES細胞についてはE14.1細胞株からさらにサブクローンB8を得て、効率よく生殖系列に伝達されることを確認した。またターゲッティング法についてはneomycinとFIAUを用いたポジティブ・ネガティブ選択を行い、サザーン法でスクリーニングするのが一般性が高いと結論された。今後、このようにして確立された方法をもとにMHC領域の欠失変異導入をES細胞で試みる予定である。
英文摘要
マウス胚幹(ES)細胞を用いたジーンターゲッティング法により、さまざまな遺伝子を欠損したマウスの作製が報告され、遺伝子の個体レベルでの機能の研究に大きな成果をあげている。ジーンターゲッティング法のため、DNAをES細胞に導入したとき、neo遺伝子がそれを挟む両側の配列で染色体DNAと相同組み換えを起こして取り込まれたES細胞クローンを選択することになる。このとき、2つの相同配列の間の距離は1〜2kb程度のDNAや挿入や欠失によっては、相同組み換えの効率に影響を与えないようである。さらに長い距離でも相同組み換えが可能なら、染色体上の離れた相同配列でneo遺伝子を挟み込んだDNAを作製し、ES細胞に導入し、相同組み換えを起こしたクローンを選択することにより、2つの相同配列の間にある複数の遺伝子を含む領域の欠失を引き起こすことも可能になると考えられる。本研究では、2つの相同配列の長さとその間の距離と相同組み換えの起こる頻度との関係をES細胞を用いて詳しく検討することにより、ジーンターゲッティングの技術を特定の染色体領域の欠失に応用できるかを評価することである。今年度はまずc-mpl遺伝子を対象に一般的なターゲッテイングを行い、方法の改良を行った。ES細胞についてはE14.1細胞株からさらにサブクローンB8を得て、効率よく生殖系列に伝達されることを確認した。またターゲッティング法についてはneomycinとFIAUを用いたポジティブ・ネガティブ選択を行い、サザーン法でスクリーニングするのが一般性が高いと結論された。今後、このようにして確立された方法をもとにMHC領域の欠失変異導入をES細胞で試みる予定である。
期刊论文(0)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Functional analysis of a novel membrane protein involved in the quality control of insulin in pancreatic beta cells
  • 批准号：
    21K06856
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 资助金额：
    $2.66万
  • 财政年份：
    2021
  • 负责人：
    宮崎 純一
  • 依托单位：
    Osaka University
バイオマテリアルを利用した幹細胞分化システムの開発
  • 批准号：
    06F06227
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 资助金额：
    $1.54万
  • 财政年份：
    2006
  • 负责人：
    宮崎 純一
  • 依托单位：
    Osaka University
ES細胞からのインスリン産生細胞分化誘導法の確立
  • 批准号：
    05F05490
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 资助金额：
    $1.54万
  • 财政年份：
    2005
  • 负责人：
    宮崎 純一
  • 依托单位：
    Osaka University
膵ベータ細胞における核内レセプターの機能の研究
  • 批准号：
    15659075
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 资助金额：
    $2.11万
  • 财政年份：
    2003
  • 负责人：
    宮崎 純一
  • 依托单位：
    Osaka University
海外基金