权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

蛋白キナ-ゼによるトランスミッタ-放出の調節機構

蛋白激酶对递质释放的调节

基本信息

批准号：
01659514
负责人：
清水信義
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)80K蛋白cDNAのクロ-ニング及び一次構造解析:ラット脳シナプトソ-ムでCキナ-ゼの主要な基質と考えられている蛋白と相同なヒト蛋白をヒト培養細胞より精製した。その過程で分子量のわずかに異なる2種の蛋白(80K-H,80K-L)が存在することが明らかとなった。80K-Hに関しては、アミノ末端よりアミノ酸配列を23残基決定した。さらにブロモシアン分解により得られた2つのペプチドのアミノ酸配列も部分的に決定した。アミノ末端から23残基に対応する塩基配列を予想しヌクレオチドを合成した。これをプロ-ブとしてλgt10ヒトA431細胞cDNAライブラリ-より、80K-H蛋白cDNAを得た。cDNA塩基配列を決定し、80K-H蛋白のアミノ酸配列を推定した。80K-Hは513アミノ酸からなり分子量は57kDaで、その中にGluが非常に多い領域が存在した。一方、80K-Lに関しては、トリプシン分解産物のアミノ酸配列を8残基決定できた。この配列は既に報告されたウシMARCKS蛋白中に見いだされ、80K-LはウシMARCKSと相同であると考えられた。80K-L蛋白アミノ酸配列より推定した塩基配列及びMARCKScDNA塩基配列の一部に相当する2種のヌクレオチドを合成し上記cDNAライブラリ-より2クロ-ンを得た。現在塩基配列を決定中である。2)モノクロ-ナル抗体の作成:80K-Hのアミノ末端20残基及び80K-Lの部分アミノ酸配列20残基に相当するペプチドを合成しKLHに接合後、免疫原としてモノクロ-ナル抗体作成を試みた。現在、得られたクロ-ンを解析中である。抗血清を用いた予備実験において抗80K-H血清は中枢及び末梢神経線維に強い染色性を示した。

1) 80K protein cDNA sequence analysis and primary structure analysis: the main matrix of 80K protein and the same protein in cultured cells were refined. Two kinds of proteins (80K-H,80K-L) with different molecular weights exist. 80K-H is related to the 23 residues in the amino acid sequence. 2. The determination of the allocation of resources for the allocation of resources The sequence of residues at the end of the chain is expected to change. A431 cell cDNA was obtained from the cDNA library of 80K protein. cDNA motif alignment was determined and 80K-H protein nucleotide alignment was estimated. 80K-H has a molecular weight of 57kDa, and Glu exists in many fields. The 80K-L residues determine the acid sequence of the decomposition products. This sequence is reported in the 80K-L MARKS file. 80K-L protein nucleotide sequence was estimated and a part of MARCKScDNA nucleotide sequence was synthesized. Now the base allocation is decided. 2) Preparation of antibody-specific antibody: 80K-H terminal 20 residues and 80K-L partial acid alignment 20 residues corresponding to the synthesis of antibody-specific antibody. Now, get the Antiserum is prepared by anti-80K-H serum, which is strongly stained in central and peripheral nervous system.