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染色体導入による転移抑制遺伝子の同定

通过染色体转移鉴定转移抑制基因

基本信息

批准号：
06281244
负责人：
押村光雄
金额：
$ 16.26万
依托单位：
Tottori University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、未知の転移抑制に関わる遺伝子のマッピングとクローニングを行うために、Y染色体を除く全ての正常細胞由来の染色体を微小核細胞融合法を用いて、マウスメラノーマ高転移株(B16-F10)へ移入し、ヌードマウスにおける造腫瘍性およびin vitro増殖特性の変化に対して抑制効果を示さないマイクロセルハイブリッド(MH)クローン(3番、4番、6番、8番、12番、13番、18番、X染色体)を選別した。分離した23種類の異なったヒト染色体移入クローン、計230クローンは、染色体解析により移入染色体の確認を行った。完全な移入染色体が高率に認められたMHクローンを用いて、転移抑制染色体を同定するための一次スクリーニングとして、ヌードマウスにおける造腫瘍性およびin vitro増殖特性についての検索を行い、これらのがん形質に対して抑制効果を示さない染色体移入クローン(3番、4番、6番、8番、12番、13番、18番、X染色体)を選別した。さらに、これらの染色体移入クローンは、以下の2種類の方法により転移能を検索した。さらに、選別した染色体移入クローンの転移能の抑制効果を受精鶏卵への注入による胎児肝転移を指標にした受精鶏卵法およびマウスへの静脈内注入による肺転移を指標にした手法により検索した。受精鶏卵法は、受精鶏卵漿尿膜上の血管へ5×10^5個の細胞を移植後、embryoの肝臓への転移結節を観察する。親細胞においては肝臓への平均転移結節数が74.6個で、その他の臓器(心臓、胃など)にも多数の転移結節が認められた。一方、18番染色体移入クローン(#18-1,9)においては、肝臓および他臓器に対して著しい転移結節数の減少が認められ、平均転移結節数は3.1および7.9であり、統計的に有意差が認められた(P<0.05)。他の3番、4番、6番、8番、12番、13番、X染色体移入クローンにおいては、親細胞と同様に高い転移能を示した。これらのことより、18番染色体上に転移抑制に係わる遺伝子の存在が示唆された。一方、マウスへの静脈内注入による肺転移を指標にした手法においては、3番、8番染色体移入クローンに、顕著な転移形成の低下が認められた。以上の結果から、(1)3番、8番染色体上にも転移抑制遺伝子が存在し、(2)受精鶏卵法での結果との相関を示さなかったことより、異なる転移能検索法を用いることが、複数の転移抑制遺伝子の検索に有効であることが示唆された。

The chromosome of normal cell origin is completely removed from Y chromosome. The method of microkaryocyte fusion is used to transfer the high quality strain (B16-F10). The results of the selection of the three chromosomes (3, 4, 6, 8, 12, 13, 18, X) are shown in the following table. 23 species of chromosomes were isolated and identified by chromosome analysis. Complete translocation chromosomes are identified at high rates of use and migration suppression chromosomes are identified at the primary stage and at the secondary stage, and are selected for tumor-producing selectivity and in vitro reproductive characteristics. Chromosome translocation (3, 4, 6, 8, 12, 13, 18, X chromosomes) is identified. In this paper, we introduce two kinds of methods to detect chromosome translocation. In addition, the selection of chromosome migration can inhibit the development of fetal liver migration index, fertilization method and its intravenous injection. After fertilization, 5×10^5 cells in the plasma and urine membrane of the fertilized egg were transplanted, and the migration nodes of the embryo liver were observed. The average number of metastatic nodes in the liver was 74.6, and most of the metastatic nodes in the other organs (heart and stomach) were recognized. The average number of shifted nodes was 3.1 and 7.9 respectively, and the statistical difference was significant (P<0.05). He has 3, 4, 6, 8, 12, 13, X chromosome shift, parent cell shift, and high mobility. The presence of a gene on chromosome 18 is an indication of the presence of a gene. A side, a side. These results include: (1) the presence of migration inhibiting genes on chromosomes 3 and 8;(2) the correlation between the results of fertilization and oocyte method;(3) the use of heterozygote transfer method; and (4) the presence of multiple migration inhibiting genes.