色素性乾皮症C群蛋白質を中心とした染色体DNA損傷修復機構の解析

以着色性干皮病C组蛋白为中心的染色体DNA损伤修复机制分析

• 批准号: 08274211
• 负责人: 益谷 央豪
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08274211/
• 关键词: ヌクレオチド除去修復; 色素性乾皮症; XPC; HHR23B

XPC-HHR23B複合体の機能を明らかにするために、それぞれの組み換え蛋白質を作成した。XPCとHHR23Bを含まない細胞抽出液を用いた無細胞系を構築して解析した結果、XPC単独では弱い修復反応しか行われず、HHR23Bの存在下で活性が促進された。HHR23Bの欠失細胞は、これまでのところ知られていないので、本研究により始めて、HHR23BのNERへの関与が示された。HHR23Bの様々な欠失変異蛋白質を作成し、XPCとの結合領域およびNERに必要な領域を調べたところ、XPC結合能をもつもののみがNER反応を促進した。このことから、HHR23BはXPCとの結合を介してNERに関与していることが示された。しかし、HHR23BのXPC結合領域以外の欠失は、NERへの影響が少なく、HHR23BがNER以外の機能をもつことを示唆しており、現在さらに解析を進めている。XPC-HHR23B複合体は、強いDNA結合能をもち、ゲルシフト法およびBIAcoreシステムを用いた結果から、一本鎖DNA<二本鎖DNA<UV照射した二本鎖DNAに結合した。UV照射DNAへの親和性は、組み換えXPC単独ではほとんど見られず、HHR23Bの共存下でのみ検出された。この結果より、XPC-HHR23Bは、複合体として染色体DNA損傷の認識を行う可能性が示唆された。現在、これらの解析に加え、XPC-HHR23Bの細胞内の挙動についても解析を進めている。

XPC-HHR23B complex functions are clearly defined, and its components are transformed into proteins. XPC and HHR23B were used in cell extracts to construct and analyze cell lines. XPC alone was weak in repair and its activity was promoted in the presence of HHR23B. HHR23B deficient cells were found to be related to HHR23B in this study. HHR23B is a protein that is missing from the binding domain of XPC. It is necessary to adjust the binding domain of XPC. The HHR23B is a combination of the XPC and the HHR23B. HHR 23B XPC is not integrated into the domain, the influence of NER is less, the function of HHR 23B is not included in NER, and the analysis is now in progress. XPC-HHR23B complex has strong DNA binding ability, and the results show that the DNA binding ability of XPC-HHR23B complex is higher than that of XPC-HHR23B complex. UV-irradiated DNA affinity is different from that of XPC and HHR23B. The results showed that the XPC-HHR23B complex was sensitive to DNA damage. XPC-HHR23B is a new type of XPC-HHR23B.

项目成果

van der Spek,P.J.et al.: "XPC and human homologs of RAD23:intracellular localization and relationship to other nucleotide excision repair complexes" Nud.Acids Res.24. 2551-2559 (1996)

van der Spek,P.J.等人：“XPC 和 RAD23 的人类同源物：细胞内定位以及与其他核苷酸切除修复复合物的关系”Nud.Acids Res.24。

Saijo,M.et al.: "Sequential binding of DNA repair proteins RPA and ERCC1 to XPA in vitro" Nucl.Acids Res.24. 4719-4724 (1996)

Saijo,M.et al.：“体外 DNA 修复蛋白 RPA 和 ERCC1 与 XPA 的顺序结合”Nucl.Acids Res.24。

Sugasawa,K.et al.: "HHR23B,a human RAD23 homologue,stimulates XPC protein in nucleotide excision repair in vitro" Mol.Cell.Biol.16. 4852-4861 (1996)

Sugasawa,K.et al.：“HHR23B，一种人类 RAD23 同源物，在体外核苷酸切除修复中刺激 XPC 蛋白”Mol.Cell.Biol.16。

Ito,K.et al.: "c-jun stlmulates origin-dependent DNA unwinding by polyomavirus large T antigen" EMBO J.15. 5636-5646 (1996)

Ito,K.et al.：“c-jun 通过多瘤病毒大 T 抗原刺激起源依赖性 DNA 解旋”EMBO J.15。