ガングリオシド依存性神経系分化過程での遺伝子発現とその制御機構の解析

神经节苷脂依赖性神经系统分化过程中基因表达及其调控机制分析

• 批准号: 09260231
• 负责人: 辻 崇一
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09260231/
• 关键词: ガングリオシド; 神経分化; Neuro2a; テトラサイクリン

1994年本研究者等は、神経芽腫瘍細胞(Neuro2aのサブクローン)にGD3合成酵素のcDNAを導入したところ細胞はGD3とb-系列ガングリオシドを発現するようになり、増殖を停止し神経突起を伸展し、コリン作動性ニューロンの方向に分化することを明らかにした。この現象をさらに解析し、以下の結果を得た。1.テトラサイクイン系を用いたGD3合成酵素遺伝子発現系による分化過程の解析:テトラサイクリン応答系を組み込むことにより、GD3合成酵素遺伝子発現から神経突起伸展が誘導されるまで二週間に渡る経時的な解析が再現性良く行えることが明らかとなった。テトラサイクリン処理後8時間後にはGD3合成酵素mRNAの発現が見られ、以後ほぼ定常的にその発現が見られた。合成されてくるガングリオシドを分析した結果、まずGD3の発現がみられ、以後次第によりシアル酸を多く持つb-系列ガングリオシドの発現が見られた。この間に、細胞の増殖は次第に抑制され、アセチルコリンエステラーゼの発現が観察されるようになった。2.分化過程で発現してくる遺伝子のクローニングとその解析:上記分化過程で新たに発現あるいは不活化される遺伝子をDifferential display法を用いて検索を行っている。現在のところほぼ80%の検索が完了した。今までに、52の異なるDNA断片の新たな発現もしくは発現増大が見られた。さらにRNA protection analysisを行いfalse positiveの排除などを進めた結果、このなかで10の異なる遺伝子が新たに発現あるいは発現増大してくることが明らかになった。DAP1は新規タンパク質で、E13以後脳神経に特異的に発現することが明らかになった。

In 1994, the researchers reported that the synthetic enzyme GD3, cDNA, was introduced into Neuro2a cells, GD3 cells, b-series cells, colonies, protuberances, stretches, activity, differentiation and differentiation. The results show that the following results are satisfactory. 1. Analysis of the process of differentiation by using GD3 synthetic enzymes. The response of the system is to analyze the process of differentiation. The response of the GD3 synthetic enzymes is to detect the protuberance and stretch of the enzyme to guide the two-way transit. The GD3 synthesis enzyme mRNA was detected at 8: 00 after treatment, and the steady state of the enzyme was detected later. Synthesize the results of the GD3 analysis, the results of the analysis and the results of the analysis. The first step is to inhibit the growth of the cells, and the second step is to restrain the population. two。 In the process of differentiation, the process of differentiation was analyzed. The new process of differentiation showed that the process of differentiation was not activated. The Differential display method was used to analyze the data. At present, 80% of the demand is over. Today, 52 years old, the DNA fragment is new, and it is very difficult to see that there is a big problem. In the RNA protection analysis line, false positive will rule out the results of the improvement, and you will need to know how to improve the results. You will need to know how to improve the performance of your computer. The new regulations of DAP1 and E13 will show that there is a special situation in the future.

项目成果

Hong Liu: "Regulated expression system for GD3 synthase cDNA and induction of differentiation in Neuro2a cells." Glycobiology. 7・8. 1069-1076 (1997)

Hong Liu：“GD3 合酶 cDNA 的调节表达系统和 Neuro2a 细胞分化的诱导。” 7・8 (1997)。