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GD3発現に伴う細胞分化による遺伝子発現とその制御機構の解析

GD3表达相关的细胞分化基因表达及其调控机制分析

基本信息

批准号：
07279249
负责人：
辻崇一
金额：
$ 1.15万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ガングリオシドの神経系における役割を解明することを目標とし、GD3合成酵素遺伝子を発現させた細胞に何がどのように引き起こされて神経突起伸展を伴う分化がもたらされるのかを生化学的・分子細胞生物学的に解明すること、さらに、他の糖鎖遺伝子に神経分化誘導遺伝子があるか否か検討することを目的とした。1.GD3合成酵素遺伝子を発現させたNeuro2a細胞の解析:本年度は、誘導可能なプロモーターを組み込んだ新しい発現系の確立を試みた。その結果、テトラサイクリン系を用いて、GD3合成酵素が誘導可能な系の確立に成功した。現在、この系を用いて、GD3合成酵素の発現を誘導後、神経突起伸展に至るまで、経時的にHPC-1、アセチルコリンステラーゼなどをはじとして何がどのように発現してくるのかmRNA,タンパク質レベルでの解析を進めている。2.他の糖鎖遺伝子に神経分化誘導遺伝子があるか否かの検討:分化誘導がGD3合成酵素遺伝子にのみ見られる現象なのか否かを若干検討した。H-タイプの糖鎖の合成に関するα1,2-フコース転移酵素をneo-耐性遺伝子を持つ発現ベクターに組み込みNeuro2aに導入した。その結果、今までa-系列のガングリオシド(GM1,GDa1,GT1a)を発現していた細胞がa-系列を発現せずほとんどFuc-GM1のみを発現するようになった(N2A-RFT-I)。この細胞は血清を除くことによりaxon様ではなくdendrite様の神経突起を持つ細胞に分化すること、外因性ガングリオシドの効果が見られないことが明らかとなった。この知見とGD3合成酵素遺伝子の知見を考えあわせると、細胞表層の糖鎖組成が神経系の分化あるいはその方向付けに何らかの関与をしているものと考えられ、さらに多方面に渡る検討が必要となってきた。

GD3 synthase gene expression in cells is the result of biochemical molecular cell biological analysis of the expression of GD3 synthase gene in cells. 1. Analysis of GD3 synthase gene expression in Neuro2a cells: This year, we tried to establish a new gene expression system. As a result, GD3 synthase was successfully induced in the system. Now, this system is in use, GD3 synthase expression is induced, the neurite extension is in progress, the HPC-1, the gene expression is in progress, and the protein analysis is in progress. 2. Discussion on the phenomenon of neuronal differentiation-inducing gene in his sugar lock gene: There are some discussions on the phenomenon of differentiation-inducing gene in the GD3 synthase gene. The synthesis of H-linked glycoproteins is related to the introduction of α1,2-deoxyribozyme into the neo-resistant gene chain. As a result, the a-series of cells (GM1, GDa1, GT1a) were found in the a-series of cells (N2A-RFT-I). The cells are divided into two groups: one group is called the "X" group, the other group is called the "X" group. The study of GD3 synthase gene is necessary for the study of the composition of glycogen lock in cell surface layer, the differentiation of nervous system, the direction of gene transfer and the relationship between gene transfer and gene transfer.