アポトーシスにおけるミトコンドリア膜透過性亢進因子の同定とその分子機構の解明

细胞凋亡中线粒体膜通透性增强剂的鉴定及其分子机制的阐明

• 批准号: 14028036
• 负责人: 清水 重臣
• 金额: $ 3.52万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14028036/
• 关键词: アポトーシス; ミトコンドリア; Bcl-2; 膜透過性亢進; 放射線

ミトコンドリアの膜透過性変化はアポトーシスのシグナル伝達に重要な役割を果たしている。また、この透過性はBcl-2ファミリー蛋白質によって主に制御されている。そこで、1)放射線や抗癌剤刺激を加えた際のミトコンドリア膜透過性亢進因子を同定する、2)アポトーシス促進型Bcl-2ファミリー蛋白質であるBid/Bikグループのミトコンドリア上のターゲット分子を同定する、を課題として研究を行った。その結果、1)放射線を照射したマウス胸腺由来の細胞質画分からミトコンドリア膜透過性亢進因子の単離同定に成功した。実際、このミトコンドリア膜透過性亢進因子をリコンビナントで作製し単離ミトコンドリアに添加すると膜透過性が亢進しシトクロムc漏出が観察された。また、放射線を照射したマウス胸腺から調整した細胞質画分に中和抗体を添加すると、ミトコンドリアからのシトクロムc漏出が緩和された。正常細胞の細胞質中には本蛋白質は認められなかったが、放射線等のDNA障害が加わると、細胞質中に観察されるようになった。さらに、anti-sense法により本蛋白質の発現レベルを抑制したり、中和抗体をマイクロインジェクションしたりすると、放射線誘導性アポトーシスは顕著に抑制された。以上より、我々が同定したシトクロムc漏出促進因子は、放射線誘導性アポトーシスのシグナル伝達に重要な役割を果たしているものと考えられた。2)に関しては、Bid/Bikに結合するミトコンドリア蛋白質を免疫沈降法により同定した。本蛋白質はミトコンドリア内膜に存在する蛋白質のホモログである。他のBcl-2ファミリー蛋白質との結合を調べると、Bcl-xやBakとの結合も確認された。現在、本蛋白質の機能解析中である。

ミ ト コ ン ド リ ア の membrane permeability variations change は ア ポ ト ー シ ス の シ グ ナ ル 伝 に important な "を cut fruit た し て い る. Youdaoplaceholder0, <s:1> また the transmissive されて Bcl-2ファ リ リ によって proteins によって master に control されて る る. そ こ で, 1) radiation や anticancer tonic to stimulate を え た interstate の ミ ト コ ン ド リ ア membrane permeability hyperfunction factor を with fixed す る, 2) ア ポ ト ー シ ス promotion the Bcl - 2 フ ァ ミ リ ー protein で あ る Bid/Bik グ ル ー プ の ミ ト コ ン ド リ ア on の タ ー ゲ ッ を ト molecules with fixed す る, を subject と し を line っ て research た. を そ の results, 1) radiation exposure し た マ ウ ス thymus origin の cytoplasm draw points か ら ミ ト コ ン ド リ ア membrane permeability hyperfunction factor の 単 from be に successful し た. Be international, こ の ミ ト コ ン ド リ ア membrane permeability hyperfunction factor を リ コ ン ビ ナ ン ト で cropping し 単 from ミ ト コ ン ド リ ア に add す る と membrane permeability が hyperthyroidism し シ ト ク ロ ム c leaking が 観 examine さ れ た. を ま た, radiation exposure し た マ ウ ス thymus か ら adjustment し た cytoplasm draw points に neutralizing antibody を add す る と, ミ ト コ ン ド リ ア か ら の シ ト ク ロ ム c leaking が ease さ れ た. This protein in normal cells の cytoplasm に は は recognize め ら れ な か っ た が, radiation の DNA handicap of が plus わ る と, cytoplasm に 観 examine さ れ る よ う に な っ た. さ ら に, anti - sense に よ り this protein の 発 now レ ベ ル を inhibit し た り, neutralizing antibody を マ イ ク ロ イ ン ジ ェ ク シ ョ ン し た り す る と, radiation induced ア ポ ト ー シ ス は 顕 the に inhibit さ れ た. Above よ り, I 々 が with fixed し た シ ト ク ロ ム c leaking promoting factor は, radiation induced ア ポ ト ー シ ス の シ グ ナ ル 伝 に important な "を cut fruit た し て い る も の と exam え ら れ た. 2) に masato し て は, Bid/Bik に combining す る ミ ト コ ン ド リ ア を immune protein sink method に よ り with fixed し た. There is a する protein ホモログである ホモログである in the inner membrane に. He <s:1> Bcl-2ファ ファ リ と と binding を べると modulating べると and Bcl-xやBakと と binding された confirming された. Now, in the <s:1> function analysis of this protein, である.

项目成果

T.Sugiyama, et al.: "Activation of mitochondrial voltage-dependent anion channel by a pro-apoptotic BH3-only protein Bim"Oncogene. 21. 4944-4956 (2002)

T.Sugiyama 等人：“促凋亡 BH3 蛋白 Bim 激活线粒体电压依赖性阴离子通道”癌基因。

Y.Akao, et al.: "Mitochondrial permeability transition mediates apoptosis induced by N-methyl【○!R】 salsolinol, an endogenous neurotoxin, and is inhibited by Bcl-2 and rasagiline, N-propargyl-1(R)-aminoindan"J.Neurochem.. 82. 913-923 (2002)

Y.Akao 等人：“线粒体通透性转变介导 N-甲基【○！R】 Salsolinol（一种内源性神经毒素）诱导的细胞凋亡，并被 Bcl-2 和雷沙吉兰、N-propargyl-1(R)-aminoindan 抑制“神经化学杂志.. 82. 913-923 (2002)

Y.Shinohara, et al.: "Permeability transition-independent release of mitochondrial cytochrome cinduced by valinomycin"Eur.J.Biochem.. 269. 5224-5230 (2002)

Y.Shinohara等人：“缬氨霉素诱导的线粒体细胞色素c的渗透性转变独立释放”Eur.J.Biochem.269.5224-5230(2002)

M.Nomura, et al.: "14-3-3 interacts directly with and negatively regulates pro-apoptotic Bax"J.Biol.Chem.. 278. 2058-2065 (2003)

M.Nomura 等人：“14-3-3 直接与促凋亡 Bax 相互作用并负向调节”J.Biol.Chem.. 278. 2058-2065 (2003)