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レンチウイルスベクターによる新規癌転移遺伝子の網羅的探索とその抑制法の開発研究

利用慢病毒载体全面寻找新型癌症转移基因并开发抑制方法的研究

基本信息

批准号：
17016040
负责人：
小柳義夫
金额：
$ 3.33万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17016040/
关键词：
乳がん細胞レンチウイルスベクターがん転移 HIV CXCR4 CD63

项目摘要

cDNA発現レンチウイルスベクターを用いた実験系より、ケモカイン分子であるSDF-1のレセプター分子(CXCR4)の細胞膜上の発現を抑制する遺伝子(CD63dN)を得ることができた。このCXCR4は乳がん細胞の血行性肺転移の過程において重要な役割を果たしていることが、がん細胞転移評価実験により明らかとなっているので、レンチウイルスベクターを用いてCD63dNを乳がん細胞(MDA-MB-231)に導入し、その転移能を抑制することを目的とした実験を行った。がん転移評価実験系として、重度免疫不全マウスであるNOGマウスに上記の細胞を尾静脈から移植し、その転移能の変化をFACSおよびHE染色により解析した。また、SDF-1/CXCR4シグナルによるがん細胞のactin重合促進作用についても、Phalloidin染色により解析した。その結果、細胞移植後30日以内にNOGマウスから肺を摘出し、ヒト細胞を分画・回収したところ、CD63dN導入細胞を移植したものにおいては、CXCR4の発現が持続的に抑制されていることが確認された。また、肺組織のHE染色解析から、CD63dN導入細胞を移植したNOGマウスでは、導入していない細胞を移植したものに比して、肺への転移が顕著に抑制されていた。さらに、Phalloidin染色により、CD63dN導入細胞では、actin重合が有意に抑制されることが確認された。現在までのところ、MDA-MB-231細胞以外のがん細胞においても、CD63dN導入によりその転移能が抑制されるという結果が得られている。CD63dN導入によるin vitroにおける細胞毒性は確認されていないことからも、この方法ががんの遺伝子治療において有用な方法の一つとなり得ると考える。

CDNA was used to detect the presence of CD63dN on the membrane of the cell. The molecular structure was isolated from the cell membrane of the SDF-1 molecule (CD63dN), which was isolated from the cell membrane. The process of blood-borne lung transfer is very important in the process of CXCR4 breast cancer. This is very important in the process of blood-borne lung transfer. This is very important in the process of blood-borne lung transfer. This is very important in the process of blood-borne lung transfer. This is an important step in the process of blood-borne lung transplantation. this is very important in the process of blood-borne lung transplantation. this is very important in the process of blood-borne lung transplantation. this is very important in the process of blood-borne lung transplantation. this is very important in the process of blood-borne lung transplantation. this is an important part of the process of blood-borne lung transplantation. this is an important part of the process of blood-borne lung transplantation. this is an important part of the process of blood-borne lung transplantation. this is an important part of the procedure. Severe immune insufficiency, severe immune insufficiency, NOG infection, transplant, transplant, FACS staining, HE staining and analysis. The superposition of actin was promoted by SDF-1/CXCR4 staining, Phalloidin staining was used to analyze the DNA. The results showed that within 30 days after cell transplantation, the lung was extracted from NOG cells, the cells were drawn back, CD63dN cells were implanted into cells, and CXCR4 cells were detected. HE staining analysis of lung tissue and lung tissue, CD63dN cell transplantation, NOG cell transplantation, lung transplantation and lung transplantation. Phalloidin staining, CD63dN transfection, actin coincidence intentionally suppressed the infection and confirmed the infection. At present, it is possible to suppress the effects of MDA-MB-231 and CD63dN in the extracellular domain of each cell. CD63dN enter the cell toxicity test to make sure that the test is correct and that the method is useful.