HIV抑制因子の遺伝子導入による新たな治療法の開発

通过基因导入HIV抑制因子开发新的治疗方法

基本信息

批准号：
16017211
负责人：
小柳義夫
金额：
$ 8.19万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16017211/
关键词：
HIV レンチウイルスベクター CXCR4 CD63 Env蛋白質 tetrasanin ウイルスベクター CD14 cDNAライブラリ

项目摘要

レンチウイルスベクター遺伝子導入系に改良を加えcDNAライブラリをヒトT細胞に効率よく発現させる実験法として完成し、ヒト白血球由来のcDNAライブラリをヒトT細胞(MT-4)に遺伝子導入し、HIV感染による細胞障害性を抑制する細胞遺伝子の同定を試みた。その結果、4回膜貫通部位を有するtetraspanin分子群に属する蛋白質であるCD63分子がHIV感染に強力に影響を及ぼすことを見出した。特にCD63のN末端の細胞外ドメインを欠損させた変異体(CD63dN)を末梢血を含めた多くの細胞にレンチウイルスベクターにより遺伝子導入を行うと、HIVのコレセプターであるCXCR4の細胞質膜への移行が完全に阻害されること、その結果、CXCR4をコレセプターとして使うX4ウイルスの感染に対して抵抗性が付与できることがわかった。このCXCR4の細胞質膜への移行阻害効果は変異体作製実験よりCD63のN末端細胞外領域の欠損により強力に誘導されること、一方、CXCR4はこの細胞内ではERなどの特異的な細胞小器官に蓄積するのではなく、ゴルジ体から細胞質膜上への移行が阻害され、リソソームで破壊されることがわかった、さらに、CXCR4の移行阻害効果にはそのC末端細胞内領域のセリン残基が必須であり、分子特異的な細胞内移行調節機構が存在することが新たにわかった。また、CD63は別のメカニズムによりウイルス感染を抑制しうることも見出された。それは、CD63を細胞質膜上に強制発現させるとCD63そのものがウイルス粒子内に取り込まれ、Env蛋白質のウイルス粒子への取り込みが阻害される結果、感染性ウイルス粒子の形成が阻害されることを見出した。

通过修饰慢病毒载体基因转移系统来完成实验方法，以有效地在人T细胞上表达cDNA文库，并将源自人白细胞衍生的cDNA文库转移到人T细胞中（MT-4），并尝试尝试由HIV感染引起的细胞毒性抑制细胞毒性。结果，我们发现CD63分子是一种属于四叠酰胺分子基团的蛋白质，具有四个跨膜位点，对HIV感染具有很大的影响。特别是，使用慢病毒载体将CD63（CD63DN）在CD63（CD63DN）（CD63DN）（CD63DN）的N末端缺乏细胞外结构域的转染（CD63DN）完全抑制了CXCR4的转移，它与HIV的cxcr 4完全抑制了HIV的转移，并抑制了HIV的转移。使用CXCR4作为共受体的病毒。 CXCR4对细胞质膜的这种抑制作用是由CD63的N末端细胞外区域的缺陷强烈诱导的，而CXCR4并未在该细胞中的ER等特定细胞器中积聚，而是在该细胞中的ER中积累，而是它从高尔基的迁移到胞质膜的迁移，并被抑制了细胞体膜的迁移并被抑制。此外，新发现，C末端细胞内区域中的丝氨酸残基对于CXCR4的抑制作用至关重要，并且内在化的分子特异性机制调节细胞易位。还发现CD63可以通过另一种机制抑制病毒感染。这一发现是，当CD63被迫在细胞质膜上表达时，CD63本身就会将其吸收到病毒颗粒中，从而抑制ENV蛋白对病毒颗粒的摄取，从而抑制了传染性病毒颗粒的形成。

项目成果

期刊论文数量（16）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Phylogenetic heterogeneity of new HTLV type 1 isolates from southern India in subgroup A.

印度南部 A 亚组新 HTLV 1 型分离株的系统发育异质性。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
AIDS Research Human Retroviruses 4
影响因子：
0
作者：
Ohkura S;et al.
通讯作者：
et al.

Th1/Th2 balance and HTLV-I proviral load in SP patients treated with interferon α

α干扰素治疗 SP 患者的 Th1/Th2 平衡和 HTLV-I 前病毒载量

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Journal of Neuroimmunology 151巻・1-2号
影响因子：
0
作者：
Feng J;Misu T;Fujihara K;Misawa N;Koyanagi Y;Shiga Y;Takeda A;Sato S;Takase S;Kohnosu T;Saito H;Itoyama Y
通讯作者：
Itoyama Y

Reproduction of menstrual changes in transplanted human endometrial tissue.

移植的人类子宫内膜组织中月经变化的再现。