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シングルセル発現プロフィール解析による疾患の発症・進展因子の同定

通过单细胞表达谱分析鉴定疾病发作和进展因素

基本信息

批准号：
15012234
负责人：
杉本幸彦
金额：
$ 3.71万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

【研究の目的】シングルセルからの発現プロフィール解析法を最適化し、疾患や毒性の分子機作を明らかにする。【研究の進め方】(1)癌やアレルギーなどの病態発現、あるいは排卵や分娩など生理機能の維持、双方に関与するプロスタノイド受容体に関して、受容体発現細胞を標的としてシングルセル発現プロフィール解析を行い、受容体の下流でどの様にその生理・病態作用を発揮するかという分子機作を明らかにする。【2003年度の研究当初計画】(1)解析の場となる生理・病態とプロスタノイド受容体の関係を明らかにする。(2)シングルセルRNA増幅法を最適化し、迅速なアレイ解析系を確立する。(3)KOマウスで、消失あるいは劇症化した疾患、ならびにKOマウスで毒性が認められた受精など生理プロセス異常について、その分子機作を解析する。【2003年度の成果】(1)癌移植実験において、宿主のEP3受容体がその血管新生に必須の働きを有することを見出した。(2)シングルセルRNA増幅法において、管腔構造の最浅層を単離する場合や3-4個の細胞塊の単離には、レーザー照射ダイセクション法を駆使し、細胞単離からRNA増幅終了まで3日間で完了できるようになった。またマニュアルダイセクションの時点でシングルセルを10-20個プールすることで増幅率の改善が認められた。(3)-1.発熱に関与する視床下部のEP3ニューロンはGABA受容体を共発現することを見いだした。(3)-2.受精障害を引き起こすEP2欠損の卵丘細胞は、炎症関連遺伝子群の発現亢進を呈し、とくに遊走因子の発現が高いことが原因であることを見いだした。(3)-3.ヒスタミン欠損により組織中に異常なマスト細胞が見いだされるのは、マスト細胞の成熟異常によることを見いだした。

[Objective] To optimize the molecular mechanism of disease and toxicity by molecular analysis (1) Pathological development of cancer, ovulation, childbirth, maintenance of physiological functions, relationship between both parties, relationship between receptor and receptor, target of receptor development cells, analysis of pathological development, development of physiological and pathological effects of receptor downstream. (1) Analyzing the relationship between field and physiology, pathology and receptor (2)Optimization of the RNA amplification method and establishment of a rapid analysis system (3)KO The analysis of the molecular mechanism of fertilization, physiological abnormality, and toxicity [Results of 2003](1) It was found that there was a need for angiogenesis in EP3 receptor during cancer transplantation. (2)In the case of 3-4 cell blocks separated from each other by the shallowest layer of the lumen structure, the RNA amplification method is used to increase the RNA amplification of the cells separated from each other. 10-20 minutes to increase the amplitude of the product. (3)-1. The EP3 in the lower part of the viewing table shows the presence of GABA receptors. (3)-2. Fertilization damage induced by EP2 damage cumulus cells, inflammation related gene subgroup increased, migration factor appeared high, and the reasons for this increased. (3)-3. The abnormal cells in the tissue are abnormal in the mature cells.