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神経難病発症に関わる異常スプライシングの分子機構解明とその制御法開発

阐明异常剪接参与难治性神经疾病发生发展的分子机制并开发控制方法

基本信息

批准号：
15030233
负责人：
今泉和則
金额：
$ 4.1万
依托单位：
University of Miyazaki (2004)Nara Institute of Science and Technology (2003)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15030233/
关键词：
スプライシング神経変性疾患タウプレセニリン SRタンパク質 Bcl-xl SMN1

项目摘要

実験計画に従って、前頭側頭型痴呆症原因遺伝子タウエクソン10の異常スプライシング制御機構の解明を目指した。さらに孤発性アルツハイマー病脳で高頻度に発現するプレセニリン2のエクソン5が欠損したスプライシング変種の発現機序、Bcl-xlの酸化ストレス時におけるスプライシング変化についても解析した。1.前頭側頭型痴呆症原因遺伝子タウのエクソン10のスプライシング制御機構:タウ遺伝子のエクソン10の5'側から12-45ntにスプライシングエンハンサー活性があること、その領域にSR関連タンパク質であるTra2β、SF2/ASF、SRp30cが直接的および間接的に結合し、エクソン10のスプライシングを制御することを明らかにした。その研究成果を論文にした(Kondo et al., Genes to Cells, 2004)。2.プレセニリン2のエクソン5が欠損したスプライシング変種の発現機序:エクソンの3'末端には核タンパク質HMGA1aが、5'側には未知の約30kDaタンパク質が直接結合し、異常スプライシングを起こすことを証明した。5'側のシス配列に結合する因子をRNA結合能を指標に動物細胞核抽出液から精製を試みている。3.神経芽細胞SK-N-SH、HeLa細胞、293細胞に、過酸化水素H2O2もしくはNO供与体SIN-1を用いて酸化ストレスを与えた。Bcl-xの選択的スプライシング産物をRT-PCRにて検出し、アポトーシス抑制型であるBcl-xLとアポトーシス促進型であるBcl-xSの存在比を比較したところ、酸化ストレスによってBcl-xS型のmRNAが増加していた。これは酸化抑制剤であるa-トコフェロールによって抑制された。現在、このスプライシング制御に関わる因子の同定を試みている。

The project aims to clarify the causes of frontal-lateral dementia and the mechanisms for its control. In addition, the occurrence of high frequency of isolated diseases, the occurrence of loss, the occurrence of abnormal diseases, the analysis of abnormal diseases, and the analysis of abnormal diseases. 1. The mechanism for controlling the disease is: the 5'side of the disease is 12- 45 nt, the activity is 12-45nt, the SR-related quality is 12 β, SF2/ASF, SRp30c, the direct combination is 12-45nt, the indirect combination is 12-45 nt, and the SRp30c is 12 - 45 nt. (Kondo et al., Genes to Cells, 2004)。2. The occurrence mechanism of the abnormal protein in the 3'end of the protein was proved by direct binding of the protein with an unknown 30kDa protein on the 1a and 5' sides of the protein. 5'-side RNA binding factor is an indicator of the purification of nuclear extracts from animal cells. 3. SK-N-SH cells, HeLa cells, 293 cells, H2O2, NO and SIN-1 cells Bcl-xS gene expression was detected by RT-PCR, and Bcl-xL gene expression was detected by RT-PCR. The acid inhibitor is a compound inhibitor. Now, this is the first time that we have tried to determine the identity of the relevant factors.