脊髄損傷にによる神経ペプチド発現誘導と神経栄養因子による制御機構

脊髓损伤诱导神经肽表达及神经营养因子的控制机制

• 批准号: 08878143
• 负责人: 野口 光一
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Hyogo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08878143/
• 关键词: 脊髄損傷; ダイノルフィン; in situハイブリダイゼーション法; 神経栄養因子; in situ ハイブリダイゼーション法

内因性オピオイドペプチドであるダイノルフィンは脊髄損傷後、脊髄で増加し二次的な神経傷害の病因になっていると考えられている。しかし、ダイノルフィンが脊髄のどの細胞に発現しているかはまだ確認されていない。そこで、脊髄損傷後のダイノルフィンの発現をラジオアイソトープ標識合成オリゴヌクレオチドプローブを用いたin situハイブリダイゼーション法により検討した。SDラットの下部胸椎を椎弓切除して脊髄に重錘を落とし、脊髄損傷モデルを作成した。ラットを損傷後4時間から1週間で潅流固定後、脊髄を取り出して組織切片を作成し、in situハイブリダイゼーション法を行った。ダイノルフィンmRNAの発現は損傷後4hより増加し始め、24h-48hでは損傷部位周辺の頭側及び尾側で著しく増加し、損傷部位頭側でのPPD mRNAの増加後の減少は麻痺の回復のみられる損傷後1wに一致していた。一方、損傷尾側でのPPD mRNAの増加の遷延はPPD mRNA発現ニューロンが、遠心性線維により影響をうけており、脊髄損傷によって脱抑制が起こり、activationされた可能性が考えらる。各個体の傾斜台角度とPPDmRNA陽性細胞数との相関関係をみると、両者は相関係数-0.848の負の相関を示し、脊髄損傷24h後の運動機能障害とPPDmRNAの発現量はよく相関していた。脊髄で増加したダイノルフィンは過去に報告された血流の減少や興奮性アミノ酸の増加や、リン脂質の加水分解、などのメカニズムを介して、脊髄に障害を与えていると考えられる。trkBmRNAの発現を同様の手法で検討した。trkBmRNAは損傷部位に限局して発現していた。BDNF (Brain derived neurotropic factor)を脊髄損傷前よりくも膜下に投与し、ダイノルフィンmRNA発現の変化を検索したが、特に発現の変化を観察されなかった。

Dynorphine是一种内源性阿片类肽，被认为在脊髓损伤后脊髓中增加，导致继发性神经损伤的发病机理。但是，尚未证实脊髓表达多酚的哪些细胞是。因此，使用放射性同位素标记的合成寡核苷酸探针通过原位杂交研究了脊髓损伤后的能吗啡的表达。将SD大鼠的下部胸椎椎骨椎板切除层降低，以使脊髓降低重量，从而形成了脊髓损伤的模型。将大鼠灌注并在受伤后固定4小时至1周，并去除脊髓以进行组织切片并进行原位杂交。受伤后4小时后4小时后，多啡肽mRNA的表达开始增加，在损伤部位周围的头孢杆菌和尾状侧显着增加，受伤部位的PPD mRNA增加后的减少与损伤后1 W一致，仅恢复了瘫痪。另一方面，受伤的PPD mRNA尾部的PPD mRNA的长时间增加受传出纤维的影响，并且可能由于脊髓损伤和激活而发生了抑制作用。当倾斜角与每个个体的PPD mRNA阳性细胞数量之间的相关性表明，两者的负相关系数为-0.848，脊髓损伤后24小时后的运动功能障碍和PPD mRNA表达水平后24小时良好相关。在脊髓中已增加的Dynorphin被认为通过先前报道的机制（如血流减少，兴奋性氨基酸增加和磷脂水解）造成脊髓损害。使用类似方法研究了TRKB mRNA的表达。 TrkBMRNA在受伤部位局部表达。在脊髓损伤之前，通过蛛网膜炎给予BDNF（脑衍生的神经性因子），并搜索了dynorphine mRNA表达的变化，但未观察到表达的特定变化。

项目成果

Tachibana, T et al: "Dynorphin mRNA expression in dorsal horn neurons following traumatic spnal cord injury" J. Neurotrauma. (In press).

Tachibana, T 等人：“创伤性脊髓损伤后背角神经元中的强啡肽 mRNA 表达”J. Neurotrauma。