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単クローン抗体を用いる壁細胞膜受容体並びに膜機能蛋白質の同定と解析

使用单克隆抗体鉴定和分析壁细胞膜受体和膜功能蛋白

基本信息

批准号：
63570317
负责人：
菅野健太郎
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63570317/
关键词：
単クローン抗体壁細胞 H^+、K^+-ATPase

项目摘要

家兎胃粘膜を遠心分画法を用いて細胞下分画し、さらにマイクロソーム画分を密度勾配超遠心法により細分画し、酸分泌を担う膜酵素本体と考えられるH^+、K^+-ATPaseを粗画分に比較して50倍以上に純化精製した。この膜画分にはH^+、K^+-ATPaseが膜蛋白質の約30%の割合で含まれていることが、SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動法によって確認されている。そこでこの膜画分を抗原としてBALB/cマウスに免疫し、その脾細胞をマウスミエローマ細胞に常法に従って融合させ、HAT培地でハイブリドーマを選択し、さらにそのなかで抗体産生能を有するものを酵素免疫測定法によって選択し、限界希釈法によって抗体産生クローンを選別した。この過程で16種類のクローンが得られたが、増殖能、免疫組織学的検索を満足させるものはこのうち5種類に限定された。これらの単クローン抗体はいずれも免疫組織学的に家兎壁細胞を特異的に染色することができた。しかしImmunoblot法ではいずれの抗体もH^+、K^+-ATPaseに相当する蛋白を含めすべての膜構成蛋白を認識せず、免疫沈降法でも反応する蛋白が得られなかった。またH^+、K^+-ATPase活性にも特に影響が認められなかった。このことから今回得られたモノクローナル抗体の組織特異性は、組織における複合体からなる高次構造の認識によるものではないかと考えられた。従って、これらの抗体は組織あるいは細胞レベルでの壁細胞の同定には有用であるものの、ある特定の膜蛋白の機能的役割や代謝を検討するうえでは必ずしも適当とはいえず、今後同様の手法を用いて特定の膜蛋白を認識する単クローン抗体の作成を行う予定である。

The expression of H^+, K^+-ATPase in gastric mucosa was purified more than 50 times. The membrane protein was identified by H^+, K^+-ATPase and SDS electrophoresis. In addition, the antibody production ability of the spleen cells was determined by enzyme immunoassay, and the antibody production ability was determined by ELISA. This process includes 16 types of DNA, 5 types of DNA, and 5 types of DNA. The antibody was found to be specific to the cell wall of the mouse. Immunoblot and immunoprecipitation methods were used to detect the proteins associated with H^+ and K^+-ATPase. H^+, K^+-ATPase activity was affected by the enzyme activity. The tissue specificity of the antibody is the recognition of the high-order structure of the complex. The antibody is organized in the same way as the cell wall cells. It is useful to study the function of specific membrane proteins. It is necessary to study the function of specific membrane proteins. The same method is used in the future.