マラリア原虫のCa^<2+>・ATPase遺伝子のクロ-ニングと全塩基配列の決定

疟原虫Ca^2+/ATPase基因的克隆及全碱基序列的测定

• 批准号: 01570219
• 负责人: 田辺 和裄
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01570219/
• 关键词: マラリア原虫; 遺伝子; クロ-ニング; Plasmodium; Ca^<2+>・ATPase

1.マラリア原虫P.yoeliiのCa^<2+>・ATPase遺伝子のクロ-ニングと全塩基配列の決定(1)既にP.yoeliiのCa^<2+>・ATPaseの遺伝子を含むと思われるクロ-ンyH4(3.3kb)を得ているので、これをプロ-ブとして遺伝子ライブラリ-をスクリ-ニングし、新たなクロ-ンYEL6(6kb)を得た。(2)サンガ-の方法によりYEL6の全塩基配列を決定した結果YEL6は全長1115個のアミノ酸よりなるタンパクをコ-ドする遺伝子を含み、その中に2個のイントロンが推定された。(3)原虫より全RNAを抽出しノ-ザン解析をおこなった所、4.4kbの位置に強いシグナルを認め、YEL6の原虫内での発現が明らかになった。(4)コンピュ-タ-処理によりYEL6のコ-ドするタンパクを他生物種から得られている陽イオン輸送性膜ATPaseと比較した結果、YEL6はAPaseの特徴であるリン酸化部位及びATP結合領域のアミノ酸配列に高い保存性を示していた。YEL6のタンパクはアミノ酸配列においてウサギ筋小胞体Ca^<2+>・ATPaseと最も高い相同性(60%)を示し、ヒト奇形腫形質膜Ca^<2+>・ATPase、ヒツジ腎Na^+・K^+・ATPase、ラット胃H^+・ATPase、酵母形質膜H^+・ATPase、L.donovaniATPaseとは相同性が低かく(36-47%)カルモジュリン結合部位も示さない。(5)さらに、YEL6のタンパクは10個のトランスメンブレン領域を示し、ウサギ筋小胞体のCa2^+・ATPaseのCa^<2+>結合部位であるグルタミン酸残基群を完全に保存していた。以上から、YEL6はP.yeeliiの細胞小器官型Ca^<2+>・ATPaseをコ-ドすることが強く示唆された。2.P.falciparumのCa^<2+>ATPase遺伝子のクロ-ニングP.yoeliiのCa^<2+>・ATPase遺伝子をプロ-ブにしてP.falciparumの遺伝子ライブラリ-をスクリ-ニングし、幾つかのクロ-ンを得た。

1. マ ラ リ ア parasite P.y oelii の Ca ^, < > 2 + ATPase, heritage 伝 son の ク ロ - ニ ン グ と salt base full column の decided to (1) both に P.y oelii の Ca ^ 2 + > <, ATPase の heritage 伝 son を containing む と think わ れ る ク ロ - ン yH4 (3.3 KB) を て い る の で, こ れ を プ ロ - ブ と し て posthumous son 伝 ラ イ ブ ラ リ - を ス ク リ - ニ ン グ し, new た な ク ロ - ン YEL6 (6 KB) を た. (2) サ ン ガ - の way に よ り YEL6 の salt base full column を decided し た results YEL6 は span 1115 の ア ミ ノ acid よ り な る タ ン パ ク を コ - ド す る posthumous son 伝 を み, そ の に in two の イ ン ト ロ ン が presumption さ れ た. (3) the parasite よ り を all RNA extraction し ノ - ザ ン parsing を お こ な っ た by strong position, 4.4 KB の に い シ グ ナ ル を confess め, YEL6 の parasite within で の 発 now が Ming ら か に な っ た. (4) コ ン ピ ュ タ - 処 Richard に よ り YEL6 の コ - ド す る タ ン パ ク を his biological か ら have ら れ て い る Yang イ オ ン conveying sex membrane ATPase と compare し た results, YEL6 は APase の, 徴 で あ る リ ン area of acidification and combined with field の び ATP ア ミ ノ acid with high に い preservation sex を shown し て い た. YEL6 の タ ン パ ク は ア ミ ノ acid with column に お い て ウ サ ギ reinforced small cell body Ca ^ 2 + < >, ATPase と most high も い identity (60%) を し, ヒ ト singular form swollen form plasma membrane Ca ^ > < 2 + ATPase, ヒ ツ ジ renal Na ^ ^ +, K + ATPase and ラ ッ ト gastric H ^ character + ATPase and yeast Membrane H ^ + ATPase, L.d onovaniATPase と は identity が low か く (36-47%) カ ル モ ジ ュ リ ン combining site も shown さ な い. (5) さ ら に, YEL6 の タ ン パ ク は 10 の ト ラ ン ス メ ン ブ レ ン field を し, ウ サ ギ reinforced small cell body の Ca2, ^ + ATPase の Ca ^ 2 + < > combining site で あ る グ ル タ ミ ン acid residues of を に completely preserved し て い た. Above か ら, YEL6 は P.y eelii の cell type small organ Ca ^ 2 + > <, ATPase を コ - ド す る こ と が く and shown strong sucking さ れ た. 2. P.f alciparum の Ca ^ > < 2 + ATPase posthumous son 伝 の ク ロ - ニ ン グ P.y oelii の Ca ^ 2 + < >, ATPase heritage 伝 son を プ ロ - ブ に し て P.f alciparum の posthumous son 伝 ラ イ ブ ラ リ - を ス ク リ - ニ ン グ し, several つ か の ク ロ - ン を た.

项目成果

田辺和裄: "マラリア原虫の分子生物学" 臨床と微生物. 16. 510-514 (1989)

Kazumi Tanabe：“疟疾寄生虫的分子生物学”临床和微生物学 16. 510-514 (1989)。

Kazuyuki TANABE: "Ion transport in malaria infected erythrocytes" Blood Cells. (1990)

Kazuyuki TANABE：“疟疾感染的红细胞中的离子运输”血细胞。

Kenji MURAKAMI,Kazuyuki TANABE and Suehisa TAKDA: "Structure of a gene of Plasmodiun yoelii for a humdog to Ca^<2+>・ATPase of the rabbit skeletal muscle sarcoploasmic reticulum"

Kenji MURAKAMI、Kazuyuki TANABE 和 Suehisa TAKDA：“Hudog 约氏疟原虫对兔骨骼肌肌浆网 Ca^<2+>·ATP 酶的基因结构”

村上賢二,田辺和裄,高田季久: "マラリア原虫(P.yoelii)Ca^<2+>・ATPase遺伝子の全塩基配列の決定" 寄生虫学雑誌. 39. (1990)

Kenji Murakami、Kazumi Tanabe、Tsukihisa Takada：“疟原虫 (P.yoelii) Ca^<2+>·ATPase 基因的完整核苷酸序列的测定”，寄生虫学杂志 39。（1990）。