レトロウイルス外膜蛋白活性化プロテア-ゼの発見と、その阻害剤による感染阻止

逆转录病毒外膜蛋白激活蛋白酶的发现及其抑制剂预防感染

• 批准号: 03152090
• 负责人: 木戸 博
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03152090/
• 关键词: レトロウイルス; エイズ; プロセシングプロテア-ゼ; 外膜蛋白前駆体; セリンプロテア-ゼ

癌ウイルス,エイズウイルスを始めとするレトロウイルスの外膜糖蛋白は、いずれもリボソ-ムで前駆体として合成された後、宿主細胞のゴルジ膜で限定分解を受け小胞体ーゴルジ装置系を通って細胞膜へ選択的に運ばれることが知られている。この限定分解が阻止されると、ウイルスは不完全ウイルスとなり感染性を失う。我々は、CD4陽性人Tリンパ球球膜分画より、ゴルジ膜あるいはERに局在するHIVー1の外膜蛋白前駆体活性化プロテア-ゼの精製に成功した。本酵素は、HIVー1外膜蛋白前駆体gp160をgp120gとgp41に変換する分子量25kDaのトリプシン型セリン性プロテア-ゼで、活性基のセリンを持つ。本酵素はgp160を基質にすると、pH6.5ー7.5に至適pHを示した。本酵素はgp160のシ-クエンスの中で、ーArg^<508>ーLeuーLysーArg^<511>ーを認識してArg^<511>の後を選択的に切断した。この切断部位のシ-クエンスーArg(Lys)ーXーArg(Lys)ーArgは、殆ど全てのレトロウイルス外膜糖蛋白前駆体の切断部位に認められる一次構造である。本酵素の活性は、人やマウスの種々のT細胞以外に、B細胞、単球、HeLa細胞、血管内皮細胞に認められ広くレトロウイルスの感染に関与していると思われる。本酵素は、これまでに報告のあったDibasicの基質を特異的に分解するKex2ファミリ-のプロテア-ゼと異なり、金属非要求性でEDTAは活性に影響を与えない。またDFPに対する強い感受性を示すが、トリプシンに対する代表的な低分子インヒビタ-のロイペプチンやアンチパインで活性が全く阻害されない。以上の事から、本酵素は基質の一次構造だけでなく高次構造を認識し、高い基質特異性を示す酵素で、インヒビタ-についても高い選択性が示唆された。

The outer membrane glycoprotein of the tumor cell, including the cell membrane, has been synthesized by the host cell membrane, and the host cell membrane has been decomposed by the cell membrane. This restriction decomposition prevents the infection from occurring. We successfully purified the outer membrane protein precursor of HIV-1 in CD4 positive human T cells by PCR and PCR. This enzyme is responsible for the conversion of HIV-1 outer membrane protein precursor gp160 to gp120 g and gp41 to a molecular weight of 25kDa. The enzyme is expressed in the medium of gp160, pH 6.5 - 7.5. This enzyme is known as gp160<508><511><511>. The cleavage site of Arg(Lys)-X-Arg (Lys)-Arg is a primary structure of the outer membrane glycoprotein precursor. The activity of this enzyme is related to the infection of human T cells, B cells, lymphocytes, HeLa cells and vascular endothelial cells. This enzyme is reported to be a Dibasic substrate specific enzyme for the decomposition of Kex2, which is not required for metals. The sensitivity of DFP is strongly expressed, and the activity of DFP is completely inhibited. The above results show that the primary structure of the enzyme substrate is different from that of the higher structure, and the specificity of the substrate is higher than that of the enzyme substrate.

项目成果

Hiroshi Kido: "A novel membrane-bound serine esterase in human T4+lymphocytes immunologically reactive with antibody inhibiting syncytia induced by HIV-1" J.Biol.Chem. 265. 21979-21985 (1990)

Hiroshi Kido：“人类 T4 淋巴细胞中的一种新型膜结合丝氨酸酯酶与抑制 HIV-1 诱导的合胞体的抗体发生免疫反应”J.Biol.Chem。

勝沼 信彦: "新しいbioreactantとしての細胞性セリンプロテア-ゼと内在性インヒビタ-" 生化学. 62. 18-31 (1990)

Nobuhiko Katsunuma：“细胞丝氨酸蛋白酶和内源性抑制剂作为新的生物反应物”生物化学 62. 18-31 (1990)。

勝沼 信彦: "Tリンパ球膜の新セリンプロテア-ゼーAIDSウイルス受容体の可能性ー" 実験医学. 9(6). 98-101 (1991)

Nobuhiko Katsunuma：“T 淋巴细胞膜中新的丝氨酸蛋白酶作为艾滋病病毒受体的可能性”实验医学 9(6) (1991)。

Hiroshi Kido: "Role of serine proteases in human T4 lymphocytes in the process of HIV-1 infection" IIIrd International Symposium on Protease Inhibitor and Biological control. 36- (1991)

Hiroshi Kido：“人类T4淋巴细胞丝氨酸蛋白酶在HIV-1感染过程中的作用”第三届国际蛋白酶抑制剂与生物防治研讨会。

Nobuhiko Katunuma: "Recent advances in research on tryptases and endogenous tryptase inhibitors" Monobraphs in Allergy. 27. 51-66 (1990)

Nobuhiko Katunuma：“类胰蛋白酶和内源性类胰蛋白酶抑制剂研究的最新进展”Monobraphs 在过敏中的应用。