retがん遺伝子導入トランスジェニックマウスを用いた細胞がん化と転移に関する研究

ret癌基因转基因小鼠细胞癌变及转移研究

• 批准号: 04152056
• 负责人: 高橋 雅英
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04152056/
• 关键词: ret癌遺伝子; トランスジェニックマウス; チロシン燐酸化蛋白; melanocytic tumor

我々はret癌遺伝子導入マウスを作製し、高率にmelanocytic tumorを発生する系を確立している。ret癌遺伝子の細胞癌化機構をさらに詳しく解析する目的でmelanocytic tumorより細胞株(Mel-ret)を樹立した。Mel-ret細胞中のチロシン燐酸化蛋白が検出され、いずれも主に膜分画に存在することが判明した。特に85kDaのチロシン燐酸化が著明であった。本年度はこれらのチロシン燐酸化蛋白の精製を試みた。Mel-ret細胞の膜分画を可溶化し、抗フォスフォチロシン抗体カラムに結合後、phenyl-phosphateで溶出した結果、約90%のpurityでチロシン燐酸化蛋白が精製された。一方、135kDa、120kDaの燐酸化蛋白はこの方法でほとんど精製できなかった。この粗精製の85kDaを用いてin vitro kinase assayを行うと、主に85kDa蛋白のみに ^<32>Pの取り込みが見られ、この蛋白自身にキナーゼ活性が存在することを示唆した。この結果はゲル内燐酸化反応によって、85kDa蛋白中に ^<32>が取り込まれたことからも支持された。In vitro kinase assayで燐酸化を受けた85kDa蛋白中のアミノ酸を分析すると、Mn^<2+>存在下ではチロシン残基が、Mg^<2+>存在下ではチロシンとセリン残基が燐酸化を受けていた。本年度の研究によりMel-ret細胞中に存在する85kDaのチロシン燐酸化蛋白がフォスフォチロシン抗体カラムを用いて効率良く精製されることが判明した。In vitroおよびゲル内kinase assayによって85kDa蛋白自身にキナーゼ活性が存在することが示唆された。来年度は85kDa蛋白を大量に精製することにより、アミノ酸配列を決定し、そのcDNAのクローニングを行う予定である。

I 々 は ret carcinoma heritage 伝 son import マ ウ ス を cropping し, high rate of に melanocytic tumor を 発 raw す を る department establish し て い る. ret carcinomatous 伝 sub-cell carcinomatous mechanism をさらに detailed く く analysis する objective でmelanocytic tumorよ <s:1> cell line (Mel-ret)を establishment of た た. Mel - ret cells の チ ロ シ ン 燐 acidic protein が 検 out さ れ, い ず れ も main points draw に に membrane す る こ と が.at し た. Special に85kDa チロシ であった phosphorescence が noted であった. For the current year, れら れら チロシ チロシ を phosphatidyl protein <s:1> refining を test みた. Mel - ret の cell membrane points draw を solubilization し, resisting フ ォ ス フ ォ チ ロ シ ン antibody カ ラ ム に combination, phenyl phosphate で dissolution し た results, about 90% の purity で チ ロ シ ン 燐 acidic protein が refined さ れ た. One formula, 135kDa, 120kDa <s:1> phosphatidyl protein <s:1> <s:1> method でほとん <s:2> refining で な な な った った. こ の crude refining の 85 kda を with い て in vitro kinase assay を line う と, main に 85 kda protein の み に ^ < > 32 P の take り 込 み が see ら れ, こ の protein itself に キ ナ ー ゼ active が exist す る こ と を in stopping し た. こ の results は ゲ ル 燐 acidification in the 応 に よ っ て, 85 kda protein in に ^ < > 32 が take り 込 ま れ た こ と か ら も support さ れ た. The In vitro kinase assay で 燐 acidification を by け た 85 kda protein の ア ミ ノ acid を analysis す る と, Mn ^ 2 + > < In the presence of で は チ ロ シ ン residues が, Mg ^ 2 + > < In the presence of で は チ ロ シ ン と セ リ ン residues が 燐 acidification を by け て い た. This annual の study に よ り に Mel - ret cells exist す る 85 kda の チ ロ シ ン 燐 acidic protein が フ ォ ス フ ォ チ ロ シ ン antibody カ ラ ム を with い て good working rate く refined さ れ る こ と が.at し た. Within the In vitro お よ び ゲ ル kinase assay に よ っ て 85 kda protein itself に キ ナ ー ゼ active が exist す る こ と が In stopping さ れ た. To year 85 kda protein は を large に refined す る こ と に よ り, ア ミ ノ acid with を decided し, そ の cDNA の ク ロ ー ニ ン グ を line う designated で あ る.

项目成果

Takashi Iwamoto: "The ret oncogene can induce melanogenesis and melanocyte development in W^v/W^v mice." Exp.Cell.Res.200. 410-415 (1992)

Takashi Iwamoto：“ret 癌基因可以诱导 W^v/W^v 小鼠的黑素生成和黑素细胞发育。”

Takashi Iwamoto: "cDNA cloning of mouse ret proto-oncogene and its sequence similarity to the cadherin superfamily." Oncogene.

Takashi Iwamoto：“小鼠 ret 原癌基因的 cDNA 克隆及其与钙粘蛋白超家族的序列相似性。”

Takashi Iwamoto: "Neuroblastoma in a transgenic mouse carrying a metallothinin/ret fusion gene." Brit.J.Cancer.

Takashi Iwamoto：“携带金属锡/ret 融合基因的转基因小鼠的神经母细胞瘤。”

Masahide Takahashi: "Proliferation and neoplastic transformation of pigment cells in metallothinein/ret transgenic mice." Pigment Cell Prs.5. 344-347 (1992)

Masahide Takahashi：“金属硫蛋白/ret 转基因小鼠中色素细胞的增殖和肿瘤转化。”

Masahiko Taniguchi: "Establishment and characterization of a malignent melanocytic tumor cell line expressing the ret oncogene." Oncogene. 7. 1491-1496 (1992)

Masahiko Taniguchi：“表达 ret 癌基因的恶性黑素细胞系的建立和表征。”