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PCRプローブを用いたジアシルグリセロールキナーゼアイソザイムのクローニング

使用 PCR 探针克隆二酰甘油激酶同工酶

基本信息

批准号：
05771978
负责人：
坂根郁夫
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ジアシルグリセロールキナーゼ(DGK)は、リン脂質生合成系の中心的酵素の一つとして研究されてきたが、近年、基質のジアシルグリセロールと反応産物のホスファチジン酸の両者とも種々の生理活性を持つことから、細胞刺激情報伝達系においてもその役割が注目されている。他の刺激情報伝達系の酵素と同様にDGKには多数のアイソザイム(未精製を含め8種以上)が存在することが示唆されている。しかし、実際に幾つのアイソザイムが存在するのか、どの様にそれらが役割を分担しているのか、また、いかなる性質や一次構造の差異があるかなどは殆ど明らかになっていない。そこで、すでに一次構造を明らかにしたDGKalpha,betaに共通な配列を基に他の(未知なものを含め)全てのアイソザイムのクローニングを目標に本研究を計画した。その結果、新たにヒトcDNAライブラリーより2種のアイソザイム(DGKgamma,DGKdelta)のクローニングに成功した。1.DGKgammaは791アミノ酸から成り(計算分子量=88,895)、C1、C2(EFハンド)、C3(亜鉛フィンガー)及びC4ドメインを持ちDGKalpha,betaと共通の基本骨格を有することが明らかになった。アミノ酸の同一性はブタDGKalphaとラットDGKbetaに対してそれぞれ52%と62%と高い価を示した。本アイソザイムはDGKalpha,betaとは異なりCa^<2+>非依存性に活性化され、網膜に多量に発現していることが見出された。更に、幾つかの細胞では25アミノ酸が欠失した不活性型の酵素をコードするmRNAが検出され、その欠失の機構や生理的な意義に興味が持たれる[投稿中]。2.DGKdelta(1169アミノ酸、約130kDa)はC3,4ドメインのみを持ち、DGKalpha,beta,gammaとは異なる基本骨格を有していた。また、そのC末端はレセプター型のチロシンキナーゼの一種であるEPHファミリーのそれと高い相同性を示した。本アイソザイムのmRNAは骨格筋に多く発現していた。現在、動物細胞で発現させ酵素学的性質を検討中である。

In recent years, in recent years, there have been significant changes in the physiological activities of enzymes in the center of the synthetic system of fatty acids (DGK). In recent years, in recent years, there have been significant changes in the physiological activities of various enzymes, such as cellular stimulation, cellular stimulation, and so on. Other stimuli are caused by the presence of enzymes and DGK enzymes in most samples (more than 8 kinds of unrefined food). There is a lot of information on the basis of the information, information and information. In the first time, we will make a common arrangement of "base" and "other" (unknown DGKalpha,beta). We need to know that there is a common arrangement for the purpose of this study. The result of the test and the successful test of the two cDNA test results (DGKgamma,DGKdelta) were successfully completed. 1.DGKgamma (calculated molecular weight = 88895), C1, C2 (EF molecular weight), C3 (molecular weight) and C4 (molecular weight = 88895) are common to DGKalpha,beta. DGKalpha identity, DGKbeta identity, DGKbeta identity, 52%, 62%, high temperature, high temperature, high temperature. This document will enable DGKalpha,beta to activate lt;2+> independent devices and network networks to show that they will not be able to generate data. In the meantime, the inactive enzymes were detected by mRNA, and the physiological meaning of the organ was not affected by the physiological meaning. 2.DGKdelta (1169 malic acid, about 130kDa) C3, c3, C3, C3, C3, This is the first step of a series of tests, such as the C-terminal, the C-terminal, the C In this article, you will find that there are many tendons in the mRNA. At present, the cells of animals and animals are suffering from the sexual problems of zymology.