エンドセリン遺伝子の発生工学的操作による血管形成・リモデリング機構の解明と応用

通过内皮素基因的发育工程阐明和应用血管生成和重塑机制

• 批准号: 08457202
• 负责人: 栗原 裕基
• 金额: $ 4.93万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08457202/
• 关键词: エンドセリン; ジーンターゲティング; 血管形成; 血管リモデリング; トランスジェニックマウス; 遺伝子導入; 組織特異性; 遺伝子治療

血管形成・リモデリング機構の解明のため、本研究ではまず、血管系特異的な遺伝子発現系の確立を目的とし、エンドセリン-1(ET-1)遺伝子プロモーター領域を用いた血管壁選択的遺伝子発現トランスジェニックマウスを作成した。1.エンドセリン-1(ET-1),アドレノメデュリン(AM)過剰発現マウス:ET-1過剰発現マウスの組織・血中ET-1濃度は野生型マウスの2〜4倍で、低体重と体毛の減少を認めたが、無麻酔無拘束下またはウレタン麻酔下での観血的動脈圧は野生型に比べ差はなく、生理的にみられる程度のET-1の産生増加は、慢性期では血圧レベルに影響しないと考えられた。AM過剰発現マウスのうち1系統は、大動脈AM濃度は野生型マウスの約10倍であった。2.血管系選択的コンディショナル遺伝子発現マウス:テトラサイクリン反応性オペレーター遺伝子配列(tetO)にレポーター遺伝子(LacZ)を結合したコンストラクト(A)、ET-1プロモーター領域9.2kbにテトラサイクリンプレッサー蛋白(tetR)とVP16C末転写活性化領域の融合蛋白を結合したコンストラクト(B)をそれぞれ作成し、A・Bそれぞれより各々複数のラインを得た。tetOによるLacZ発現をin vitroで確認した後、現在それぞれの系の交配を進め、両方のコンストラクトが組み込まれたマウスの樹立行っている。以上から、この血管壁遺伝子発現系による遺伝子発現は生理的産生量に匹敵もしくは凌駕するレベルを示し、血管系における遺伝子機能解析への高い応用性が示された。さらに、コンディショナル遺伝子発現系の応用により、血管系でのテトラサイクリンによるON-OFFの調節が期待される。現在、ウイルス系ベクターを用いた遺伝子導入へ向けての準備を進めている。

Blood vessel formation, リ モ デ リ ン グ institutions の interpret の た め, this study で は ま ず, blood vessels, is a specific な heritage 伝 発 now son is の establish を purpose と し, エ ン ド セ リ ン - 1 (ET 1) heritage 伝 son プ ロ モ ー タ を ー field with い traces of blood vessels to た sentaku 伝 son 発 now ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス を made し た. 1. エ ン ド セ リ ン - 1 (ET - 1), ア ド レ ノ メ デ ュ リ ン (AM) before turning 発 now マ ウ ス : ET - 1 before turning 発 now マ ウ ス の tissue, blood concentration of ET - 1 は wild-type マ ウ ス で の 2 ~ 4 times, low weight と hair の reduce を recognize め た が, hemp 酔 inhibited under ま た は ウ レ タ ン hemp 酔 under で の 観 artery blood 圧 は に wild type Worse than べ は な く, physiological に み ら れ る degree の produce raised plus は の ET - 1 and chronic で は blood 圧 レ ベ ル に influence し な い と exam え ら れ た. The occurrence of AM in the <s:1> ウス うち うち1 system うち and the AM concentration in the large arteries うち wild-type ウス ウス is about 10 times であった. 2. Blood vessels are sentaku コ ン デ ィ シ ョ ナ ル posthumous son 伝 発 now マ ウ ス : テ ト ラ サ イ ク リ ン anti 応 sex オ ペ レ ー タ ー heritage 伝 with sequence (tetO) に レ ポ ー タ ー heritage 伝 child (LacZ) を し た コ ン ス ト ラ ク ト, ET - 1 (A) プ ロ モ ー タ ー area 9.2 KB に テ ト ラ サ イ ク リ ン プ レ ッ サ ー protein (te) TR) と VP16C の planning write activeness field at the end of the fusion protein を combining し た コ ン ス ト ラ ク ト (B) を そ れ ぞ れ make し, a. B そ れ ぞ れ よ り each 々 plural の ラ イ ン を た. TetO に よ る LacZ 発 を now in vitro で confirm し, now after た そ れ ぞ れ の is の mating を into め, struck の コ ン ス ト ラ ク ト が group み 込 ま れ た マ ウ ス の set line っ て い る. Above か ら, こ の traces of blood vessel walls 伝 発 now son is に よ る posthumous son 伝 発 now は discharge of physiological に match も し く は above す る レ ベ ル を し, vascular system に お け る heritage 伝 sub function analytical へ の high い 応 use sex が shown さ れ た. さ ら に, コ ン デ ィ シ ョ ナ ル posthumous son 伝 発 now is の 応 with に よ り, vascular で の テ ト ラ サ イ ク リ ン に よ る ON - OFF の adjust が expect さ れ る. Now, ウ イ ル ス department ベ ク タ ー を with い た posthumous son 伝 import へ to け て の prepare を into め て い る.

项目成果

栗原 裕基: "Targeting gene expression to the vascular wall in transgenic mice using the murine preproendothelin-1 promoter." J.Clin.Invest.95. 1335-1344 (1995)

Yuki Kurihara：“使用鼠前内皮素原 1 启动子将基因表达靶向转基因小鼠的血管壁。”J.Clin.Invest.95 (1995)。

南野 徹: "Endothelin converting enzyme(ECE-1)expression in the rat vascular injury model and human coronary atherosclerosis." Circulation. 95. 221-230 (1997)

Toru Minamino：“大鼠血管损伤模型和人冠状动脉粥样硬化中的内皮素转换酶 (ECE-1) 表达。” 95. 221-230 (1997)。

栗原 裕基: "Regulation of vascular tone." (in) Molecular Cardiovascular Medicine. 275-288 (1995)

Yuki Kurihara：“血管张力的调节”（《分子心血管医学》）275-288（1995）。

栗原 由紀子: "Aortic arch malformations and ventricular septal defect in mice deficient in endothelin-1." J.Clin.Invest.96. 293-300 (1995)

Yukiko Kurihara：“内皮素 1 缺乏的小鼠的主动脉弓畸形和室间隔缺损。”J.Clin.Invest.96 (1995)。

前村 浩二: "Sequence analysis,chromosomal location and developmental expression of the mouse preproendothelin-1 gene." Genomics. 31. 177-184 (1996)

Koji Maemura：“小鼠前内皮素原 1 基因的序列分析、染色体定位和发育表达。” 31. 177-184 (1996)。