成人T細胞白血病発症に関与するウイルス感染以外の発ガン因子の同定

鉴定除病毒感染外与成人 T 细胞白血病发展相关的致癌因素

基本信息

批准号：
08670336
负责人：
藤井雅寛
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670336/
关键词：
HTLV ウイルス成人T細胞白血病アポトーシス Fas

项目摘要

1、HTLV-I感染細胞株におけるFas依存性アポトーシス抵抗性:リンパ球のトランスフォーメーションの1ステップとしてアポトーシスの異常が想定されている。そこで、HTLV-I感染細胞株についてFas依存性アポトーシスに対する感受性を検討した。HTLV-Iに感染した細胞株はFas抗体によって誘導されるアポトーシスに対して抵抗性を示した。アポトーシス抵抗性は2つのメカニズムによることが示唆された。1つはウイルス蛋白のTax,もう1つは細胞因子FAP-1(Fas-associated phosphatase)の発現であった。Fas依存性アポトーシスに感受性を示すT細胞株にTaxを発現させることによって、抵抗性が誘導され、Taxによるアポトーシス抑制作用が証明された。Taxは転写活性化因子であり、転写活性化能を失った変異体では抵抗性誘導活性が失われることから、Tax依存性に発現される細胞因子の関与が推定された。一方、FAP-1はFasに直接結合することさらにFas依存性のアポトーシスを抑制することがすでに知られている。FAP-1とTaxの発現(RNA)には相関が見られず、これらは独立して機能していた。2、Fasリガンド発現誘導機構の解析:HTLV-I関連疾患の病巣において、Fasリガンドの発現量の亢進が報告されている。このメカニズムを解明するために、Fasリガンドのプロモーター領域を含むゲノムDNAを遺伝子クローニングし、その配列を決定した。Fasリガンドのプロモーター活性を測定するために、プロモーター領域をリポータープラスミド(ルシフェラーゼ発現ベクター)の上流に組み込んだ。このプラスミドをT細胞株に一過性に導入したところ、転写活性が検出された。このプラスミドを用いて、ウイルス感染による、Fasリガンドの発現誘導機構の解析を進めている。

1。HTLV-I感染细胞系中FAS依赖性凋亡抗性：凋亡异常被认为是淋巴细胞转化的一步。因此，我们研究了对HTLV-I感染细胞系的FAS依赖性凋亡的敏感性。感染HTLV-I的细胞系对FAS抗体诱导的凋亡具有抗性。有人提出抗凋亡耐药性是由两种机制引起的。一种是病毒蛋白税的表达，另一种是细胞因子FAP-1（FAS相关磷酸酶）的表达。易受FAS依赖性细胞凋亡的T细胞系中税收的表达导致抗药性，这表明税收的抑制作用。税收是一种转录激活因子，并且失去了激活抗药性诱导活性的转录丧失能力的突变体，导致以税收依赖性方式表达的细胞因子。另一方面，FAP-1已经知道直接与FAS结合并抑制FAS依赖性凋亡。 FAP-1与税收表达（RNA）之间没有相关性，并且这些相关性独立起作用。 2。FAS配体表达诱导机制的分析：在HTLV-I相关疾病的焦点中，已经报道了FAS配体的表达水平升高。为了阐明这种机制，将含有FAS配体启动子区域的基因组DNA进行了基因克隆和测序。为了测量FAS配体的启动子活性，将启动子区域掺入了报告基因质粒（荧光素酶表达载体）的上游。该质粒瞬时引入T细胞系，并检测到转录活性。使用这种质粒，正在分析正在使用病毒感染引起的Fas配体表达的机制。