モータードメイン以外の機能ドメインを合わせ持つミオシン分子の検索

寻找具有运动结构域以外的功能结构域的肌球蛋白分子

• 批准号: 10175206
• 负责人: 足立 博之
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10175206/
• 关键词: モータータンパク質; ミオシン; 機能ドメイン

本研究は,走化性運動,貪食など多様な細胞運動を行い,分子細胞生物学的解析に有利な細胞性粘菌より,新規のミオシン分子を検索してその分子・細胞レベルの機能を明らかにすることを目的としている。今年度は,昨年度に発見した新規ミオシンMyoKの解析を進めた。まず,MyoK遺伝子及びcDNAの全域をクローニングし,全塩基配列を決定した。推定されるアミノ酸配列から,MyoKは以下の特徴的な構造を持つことが明らかになった。第一に,MyoKは,モータードメインのloop-1領域に,これまでに見いだされたミオシンの中で最も長い142アミノ酸からなる挿入配列を持つ。この領域(GPR領域)は,極端にGlyとProに富むことから,ATP非感受性アクチン結合部位と予想されため,この配列をクラスIIミオシンの当該部位に挿入し,ATPase活性のアクチン濃度依存性を検討した結果,実際に,アクチンに対する親和性の上昇が見られた。今後,MyoKが,ATPaseサイクル中恒にアクチンと結合した状態で滑る可能性を検討する必要がある。第二に,MyoKは,軽鎖結合部位を形成するIQ配列を持たない。この特徴は,クラスXIVミオシン以外では初めて見られた。第三に,MyoKは,これまで見いだされたミオシンの中で最も短い尾部を持つ。この尾部は,正電荷に富み,細胞膜との相互作用が予想された。第四に,頭剖配列の系統樹から,MyoKは,クラスIミオシンに分類された。次に,MyoKの生理的機能を解析した。Northernブロッティングより,MyoKの転写は,発生開始2時間後に一過的に増加することがわかった。さらに,相同組換えを利用してMyoK欠損株を作成したが,少なくとも生育,発生には影響は出なかった。以上より,MyoKは,細胞性粘菌の他のクラスIミオシンと重複した生理的機能を持ち,発生段階のごく初期に働くものと予想された。

This study is about ambulatory motility, gluttony and multi-cell motility, and the analysis of molecular and cell biology is beneficial to the cellular slime mold.り, のミオシンmolecule を検SO してそのmolecule・cell レベルのFUNCTION を明らかにすることをpurpose としている. This year's new rules and new rules for last year's MyoK are analyzed.まず, MyoK 伝子 and びcDNA の全区 をクローニングし, 全婩组array をdeterminationした. It is presumed that the されるアミノから, MyoKは following special features of the な structure をhold つことが明らかになった. First に, MyoK は, モータードメインのloop-1 area に, これまでに见いだされたミオシンの中で长い142アミノ acid からなるinsert arrangement をhold つ.この区(GPR field)は, ULTIMATE GlyとProに富むことから, ATP non-receptive アクチンbinding part とyuthinking されため, この配array をクラスII When the site is inserted, the ATPase activity is concentration-dependent The result of を検question is した, 実记に, アクチンに対する compatibility のrise が见られた. From now on, MyoK, ATPase and ATPase will continue to work together to achieve the best possible results. The second one is MyoK, and the IQ arrangement is formed at the lock junction.この特徴は,クラスXIVミオシンでは初めて见られた. The third one is MyoKは, the shortest one in the middle and the last one in the shortest one.このtailは, positive charge に富み, cell membrane とのinteraction が yu want された. The fourth one is the phylogenetic tree of cephalometric arrangement, MyoK, and the classification of クラスIミオシンに. This time, MyoK's physiological function is analyzed. Northern ブロッティングより, MyoK の転WRITE は, and the に姗加することがわかった started 2 hours after the birth.さらに, the same combination of えを using してMyoK defective strain を made したが, less なくともfertility, 発生にはeffect は出なかった. The above より, MyoKは, cellular slime mold のクラスI ミオシンと Repeat したphysiological function をhold ち, 発生stage のごくInitial stage に働くものと yu want された.

项目成果

K.Tanaka et al.: "Identification of pritein kinase B(PKB) as a phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate binding protein in Dictyostelium discoideum." Biosci.Biotechnol.Biochem.(in press). (1999)

K.Tanaka 等人：“盘基网柄菌中蛋白激酶 B (PKB) 作为磷脂酰肌醇 3,4,5-三磷酸结合蛋白的鉴定。”

J.Saito et al.: "Dictyostelium TRFA homologous to yeast Ssn6 is required for normal growth and early development" J.Biol.Chem.273. 24654-24659 (1998)

J.Saito 等人：“正常生长和早期发育需要与酵母 Ssn6 同源的盘基网柄菌 TRFA”J.Biol.Chem.273。

M.Yazu et al.: "Novel Dictyostelium unconventional myosin MyoK is a class I myosin with the longest loop-1 insert and the shortest tail." Biochem.Biophys.Res.commun.(in press). (1999)

M.Yazu 等人：“新型盘基网柄菌非常规肌球蛋白 MyoK 是一种 I 类肌球蛋白，具有最长的 Loop-1 插入片段和最短的尾部。”