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モータードメイン以外の機能ドメインを合わせ持つミオシン分子の検索

寻找具有运动结构域以外的功能结构域的肌球蛋白分子

基本信息

批准号：
12030207
负责人：
足立博之
金额：
$ 1.79万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12030207/
关键词：
細胞性粘菌モータータンパク質ミオシン MyoM アクチン細胞骨格 GFP

项目摘要

これまでの研究で、アクチン細胞骨格動態を研究するための良いモデル系である細胞性粘菌から新規のミオシン2種(MyoK,MyoM)を発見し、発現時期、遺伝子欠損株の表現型について検討を行ってきた。今年度は、MyoMの細胞内局在についてさらに検討を加えた。昨年度の終わりに、GFPを融合したGFP-MyoMの作製を行い、GFP-MyoM高生産株では、著しい生育速度の低下がみられること、GFP融合蛋白質が細胞内小胞の膜に局在することを明らかにした。今年度はGFP-MyoMが局在している小胞が細胞内のどの小胞かについて検討した。可能性として飲作用で培地を取り込んでできるマクロピノソームと浸透圧応答に関与していると考えられる収縮液胞がある。後者のマーカーであるカルモジュリンとの共局在を検討するため、細胞性粘菌のカルモジュリンに対する抗体を用いた間接蛍光抗体法でMyoMとの2重染色を行ったところ、両者は異なるパターンを示した。高発現により成育が遅くなるのは飲作用の低下による栄養の取り込みの低下である可能性も考えるとMyoMが飲作用に関わりマクロピノソームに局在する可能性が示唆された。今年度の終了までに、マクロピノソームを蛍光デキストラン染色し、またその膜をRacFで染色して共局在を調べる予定であり、現在RFP-RacFを構築中である。

This study was conducted to investigate the development of cytoskeleton dynamics in different strains. Two new strains (MyoK,MyoM) of cellular myxomycetes were identified, and the phenotypes of defective strains were studied. This year, MyoM's intracellular bureau is in the middle of the discussion. At the end of last year, GFP fusion protein was produced in GFP-MyoM production, GFP-MyoM high production line was produced in low fertility rate, GFP fusion protein was produced in intracellular vesicle membrane. This year, GFP-MyoM is in the middle of the cell. The possibility of a chemical reaction is that the chemical reaction may occur in the presence of a solvent. The latter is shown by the indirect light antibody method. The possibility of high development, low development, low development, high development, low development, high development, low development, low development, high development, low development, high development, low development, development At the end of this year, the RFP was constructed in advance.