课题基金 / 基金详情

イオンチャネルの分子内構造変化と分子間相互作用の光学的新手法による解析の試み

イオンチャネルの分子内構造変化と分子間相互作用の光学的新手法による解析の試み
尝试使用新的光学方法分析离子通道中的分子内结构变化和分子间相互作用
批准号：
11877010
负责人：
久保 義弘
金额：
$1.41万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1999 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877010/
关键词：
内向き整流性K^+チャネル構造変化光学的測定FRET

项目摘要

项目成果

久保 義弘的其他基金

相似基金

相关文献

中文摘要
翻译
点击翻译按钮获取中文摘要
英文摘要
分子内構造の変化を光学的に解析するためには、目的とする場所に特異的に蛍光ラベルを導入することが鍵となる。そこで、本研究においては、その第一歩として、この点についての検討を進めた。蛍光ラベルの導入法として、分子生物学的にGFP蛋白との融合蛋白を作る方法と、Cys残基に反応する化学合成された蛍光ラベルを用いる方法がある。クローン化された内向き整流性K+チャネルIRK1を対象として、まず、前者を試したところ、ポア領域等の厳密な構造が機能に要求される領域においては、GFPの「かさばり」が、機能の重篤な障害となることが明らかとなったので、この方法はポア領域の構造変化の研究には用いないことにした。後者の、点変異により導入したCys残基を利用した方法によりラベルを試みたところ、IRK1チャネルのCys149といったポアの外側入り口に、チャネル機能を障害することなく導入することができた。この際、発現系に内因的に存在する他の膜蛋白へのラベルの導入がバックグラウンドとして起きたが、IRK1チャネルをpCXN2高発現ベクターに組み入れHEK293T細胞に導入することにより、チャネルの発現密度を飛躍的に高めたところ、他の蛋白によるバックグラウンドと識別することができた。今後、チャネルの状態変化に伴う導入した蛍光強度の変化について定量的な解析を進め、さらに、2種の蛍光色素をラベルしてエネルギー転移の評価による構造変化の解析を行う。
期刊论文(0)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
チャネルにおけるイオン透過と非典型的膜電位依存性ゲーティングのカップリングの検証
チャネルにおけるイオン透過と非典型的膜電位依存性ゲーティングのカップリングの検証
膜電位センサーを持たないATP受容体チャネルP2X2の膜電位依存的構造変化の解析
TRPA1チャネルのカフェインに対する応答の質的種間差異に基づく活性化機構の解明
海外基金