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イオンチャネル・受容体群の「膜上直接的相互作用」によるシナプス伝達の調節機構

イオンチャネル・受容体群の「膜上直接的相互作用」によるシナプス伝達の調節機構
离子通道与受体“直接膜相互作用”调节突触传递机制
批准号：
16015238
负责人：
久保 義弘
金额：
$3.84万
依托单位：
National Institute for Physiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2004 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16015238/
关键词：
ATP受容体P2X2チャネルポア発現密度アフリカツメガエル卵母細胞動的構造変化

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项目成果

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アフリカツメガエル卵母細胞にイオンチャネル型のATP受容体P2Xを発現させ、2本刺し膜電位固定下でATP投与後の電流を記録し、受容体の種々の性質を発現レベルとの関連において解析し以下の知見を得た。(1)チャネルポアのイオン選択性の指標であるP_<NMDG+>/P_<Na+>は発現密度と負の相関を示した。(2)内向き整流性の強弱は発現密度と負の相関を示した。(3)高濃度のATP(100uM)により弱い内向き整流性電流を呈する発現密度の高い細胞に、低濃度ATP(3uM)を投与するとその内向き整流性は増強した。(4)[ATP]-応答関係のKdの値は発現密度と負の相関を示した。(5)ポア上部の点変異1328Cにより上記の発現密度に依存したポアの性質の変化がほぼ消失した。以上の結果から「ATP投与により開状態に入った、ごく近傍にあるP2X_2受容体チャネル間の相互作用によりポア上部においてなんらかの構造変化が起こり、ポアの性質やリガンド感受性が変わる。」ことが想定された。さらに、P2X2受容体チャネルのリガンド投与による動的構造変化を、FRET法によりリアルタイムで解析することを目的として、C末端に蛍光蛋白CFPもしくはYFPを付加したコンストラクトを作成し、全反射照明下で膜に発現している分子由来の蛍光のみを測光した。実験当初、リガンド投与によりFRET値が変化するというデータを得ていたが、その後の解析により、CFPおよびYFPの両者が減少することが明らかになった。すなわち、C端部分が、リガンド投与によって、全反射照明の強度の弱い膜から離れた部位にシフトする可能性が示唆された。この点について、さまざまな部分に蛍光蛋白を付加したコンストラクトを作成し、さらに解析を進めている。
期刊论文(6)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Density Dependent Changes of the Pore Properties of P2X_2 Receptor
P2X_2 受体孔性质的密度依赖性变化
DOI： --
发表时间： 2004
期刊： Journal of Physiology 558
影响因子： --
作者： [Fujiwara, Y., Kubo, Y.]
通讯作者： Y.
Biochemical and Physiological analyses of the RGS8 function
RGS8功能的生化和生理学分析
DOI： --
发表时间： 2004
期刊： Methods in Enzymology 390
影响因子： --
作者： [Saitoh, O, Kubo, Y.]
通讯作者： Y.
Ligand-induced rearrangement of the intracellular dimeric conformation of metabotropic glutamate receptor1a.
配体诱导的代谢型谷氨酸受体 1a 细胞内二聚体构象的重排。
DOI： --
发表时间： 2004
期刊： Nature Structural & Molecular Biology 11
影响因子： --
作者： [Tateyama, M., Abe, H., Nakata, H., Saitoh, O, Kubo, Y.]
通讯作者： Y.
チャネルにおけるイオン透過と非典型的膜電位依存性ゲーティングのカップリングの検証
チャネルにおけるイオン透過と非典型的膜電位依存性ゲーティングのカップリングの検証
膜電位センサーを持たないATP受容体チャネルP2X2の膜電位依存的構造変化の解析
TRPA1チャネルのカフェインに対する応答の質的種間差異に基づく活性化機構の解明
国内基金
海外基金
低强度噪声预暴露诱导P2X2通过增韧效应减轻噪声性突触损伤的机制研究
  • 批准号：
    82260224
  • 项目类别：
    地区科学基金项目
  • 资助金额：
    35万元
  • 批准年份：
    2022
  • 负责人：
    熊园平
  • 依托单位：
    南昌大学
内源表达的异源三聚体P2X2/3的配体识别与门控调节机制研究
  • 批准号：
    31900808
  • 项目类别：
    青年科学基金项目
  • 资助金额：
    25.0万元
  • 批准年份：
    2019
  • 负责人：
    杨晓娜
  • 依托单位：
    中国药科大学
移植微囊化雪旺细胞对P2X2/3受体介导神经病理性疼痛的作用研究
  • 批准号：
    81760418
  • 项目类别：
    地区科学基金项目
  • 资助金额：
    34.0万元
  • 批准年份：
    2017
  • 负责人：
    刘曾旭
  • 依托单位：
    南昌大学
颈部交感神经节P2X2、P2Y12受体与心肌缺血引发神经元与卫星胶质细胞的病理性相互作用研究
  • 批准号：
    81460200
  • 项目类别：
    地区科学基金项目
  • 资助金额：
    48.0万元
  • 批准年份：
    2014
  • 负责人：
    刘双梅
  • 依托单位：
    南昌大学