シグナル伝達の細胞内局在に関する薬理ゲノム科学的解析

信号转导亚细胞定位的药物基因组学分析

• 批准号: 11877409
• 负责人: 田中 利男
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877409/
• 关键词: カルシウム; カルシウム結合蛋白; EFハンド; S100C; ハイポキシアレスポンスエレメント

治療薬の作用機序を解析するために、シグナル伝達の細胞内局在機構を明らかにすることが不可欠である。我々は全く新しいアプローチによりこの細胞内シグナル伝達の細胞内局在機構を解析することを可能にした。我々はS100C遺伝子をクローニングし、S100C遺伝子の発現制御に関与するプロモーター領域やmRNA分解調節に関与すると思われる3'非翻訳領域の塩基配列も明らかにしているので、この領域の塩基配列と対応するシグナル伝達の細胞内局在機構を解析した。そこで、今年度の本研究では下記の成果が得られた。1)S100C遺伝子発現を、プロモーター領域のリポーターアッセイにより解析した。S100Cのハイポキシアによるプロモーター領域のレスポンスエレメントの解析によりHIF-1によりS100Cの発現が制御されてたが、カルシウムシグナリングに関してプロモーター領域のレスポンスエレメントは認められなかった。2)S100C遺伝子発現が細胞内局在カルシウムシグナリングにより、転写後調節を受けている可能性が高いため、UVクロスリンク法によりS100CのmRNAの分解に関与する蛋白質を現在解析中である。3)細胞内局在の異なるカルシウムシグナリングにより制御される遺伝子発現変化をデファレンシャルディスプレイ法により解析した。S100Cと同じファミリーのS100A4では、タプシガーギンにより減少した。一方、KCIによる脱分極では減少しなかった。従って、細胞内局在の異なるカルシウムシグナリングにより遺伝子発現が制御されていることが見出された。現在、詳細なメカニズムを解析している。今後、さらにそれぞれ作用における分子機構を明らかにするため、細胞内局在が明らかなカルシウムシグナリングによる遺伝子発現制御機構をIn Situ PCRで解析する予定である。

为了分析治疗剂的作用机理，必须阐明信号传导的亚细胞定位机制。我们已经可以通过全新的方法来分析该细胞内信号传导的亚细胞定位机制。我们克隆了S100C基因，并揭示了参与S100C基因调节的启动子区域和3'未翻译区域的核苷酸序列，该区域被认为参与mRNA降解调节，因此我们分析了该区域的核苷酸序列，并分析了该区域的核苷酸序列以及信号序列的核定序列机构的信号定位机构。因此，今年的研究取得了以下结果：1）通过启动子区域的记者测定法分析了S100C基因表达。 S100C缺氧对启动子区域的响应元件的分析对HIF-1的S100C进行了调节，但在钙信号传导中未发现启动子区域的响应元件。 2）由于S100C基因表达可能通过亚细胞局部钙信号传导受到转录后调节，因此我们目前正在通过UV交联通过UV交叉链接来分析与S100C mRNA降解有关的蛋白质。 3）通过鉴别显示方法分析了由钙信号传导调节的基因表达变化。 S100A4与S100C是同一家族，由于Thapsigargin而减小。另一方面，KCI去极化并没有减少。因此，发现基因表达是由具有不同亚细胞定位的钙信号传导调节的。目前，我们正在分析详细机制。将来，为了进一步阐明每种动作中的分子机制，我们计划通过钙信号传导分析基因表达调控机制，其中使用原位PCR，其中亚细胞定位是明确的。

项目成果

Suzuki H: "Heme oxygenase-1 gene induction as an intrinsicregulation against delayed cerebral vasospasm in rats"J Clin Invest. 104・1. 59-66 (1999)

Suzuki H：“血红素加氧酶-1 基因诱导作为针对大鼠迟发性脑血管痉挛的内在调节”J Clin Invest 104・1（1999）。