新しいカルシウムシグナリングの分子機構に関する薬理学的研究

新型钙信号分子机制的药理学研究

• 批准号: 10877017
• 负责人: 田中 利男
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877017/
• 关键词: カルシウム; カルシウム結合蛋白質; EFハンド; ESTデータベース; in silico cDNAクローニング; 悪性腫瘍

近年、国際的ヒトゲノムプロジェクトの進展は著しいものがあり、特にEST(expressed sequence tag)プロジェクトにより、現在ではヒト発現遺伝子断片のほとんどがESTデータベースに登録されるようになった。我々は、かねてよりESTデータベースに注目し、サイバー上における新しいヒトカルシウム結合蛋白質のcDNAクローニングを試みた。独自に開発したデータ処理ソフトウェア、インターネット技術、シークエンスアッセンブラーソフトウェア、PCRテクノロジーを統合的に駆使することにより、現在までに全く報告されてない新しいカルシウム結合蛋白質のcDNAクローニング(ヒト、ウシ、ラット)に成功し、Calmedulinと命名した。この全く新しいカルシウム結合蛋白質は、いわゆるEFハンド蛋白質ファミリーであり、その分子構造が最も近いものは、centrinである。centrinは高等動物では中心体に局在し、細胞周期制御に関与していC驍アとが強く示唆されている。そこで今年度の本研究では下記の成果が得られた。(1) ポリクローナル抗体を作製しました。(2) その発現は全身に認められるが、特に胎児期での遺伝子発現が著明で成長とともに減少していることを明らかにした。(3) ほとんどのヒト癌において過剰発現が認められることを明らかにした。(4) 大腸菌を用いて組み換え蛋白質を作製・精製した。(5) 精製したcalmedulin蛋白質を用い、アフィニテークロマトグラフィーを行った結果、幾つかの結合蛋白質を見出した。その中の一つにreticulocalbinと高い相同性を有する蛋白質を認めた。今後、さらにその結合様式、結合定数、分子構造解析により、Calmedulinの生理的役割とカルシウムシグナル伝達機構を明らかにする予定である。

近年来，国际人类基因组项目取得了重大进展，尤其是，大多数人类表达的基因片段现已在EST数据库中注册，特别是EST（表达的序列标签）项目。我们长期以来一直在研究EST数据库，并试图将新的人类钙结合蛋白在网络上克隆。通过使用我们自己开发的数据处理软件，Internet技术，测序汇编软件和PCR技术，我们成功克隆了一种尚未报道迄今尚未报道并命名为Calmedulin的新钙结合蛋白的cDNA（人，牛，大鼠）。全新的钙结合蛋白是所谓的EF手蛋白的家族，最接近的分子结构是中心蛋白。 Centrin位于上层动物中的中心体中，并参与细胞周期调节，并强烈建议为C-A。因此，今年的研究提供了以下结果：（1）制备多克隆抗体。 （2）尽管在整个身体中都观察到其表达，但据揭示了基因表达尤其在胎儿期间被标记并随着生长而降低。 （3）已经揭示了大多数人类癌症中观察到的过表达。 （4）制备重组蛋白并使用大肠杆菌纯化。 （5）使用纯化的加色素蛋白进行兴奋剂色谱法，并发现了几种结合蛋白。其中之一是一种与网状世俗同源性高的蛋白质。将来，我们计划通过其结合模式，结合常数和分子结构分析来进一步阐明卡尔中素和钙信号传导机制的生理作用。

项目成果

田中利男: "21世紀の創薬科学(薬理ゲノム科学と創薬)" 共立出版, 18 (1998)

田中敏夫：“21世纪药物发现科学（药理学基因组科学和药物发现）”Kyoritsu Shuppan，18（1998）

田中利男: "よくわかるRDE3阻害薬の基礎と臨床(cAMPとPDE阻害薬の経緯およびPDEのアイソザイムとその分布)" Excerpta Medica, 118 (1998)

Toshio Tanaka：“RDE3 抑制剂的基本和临床解释（cAMP 和 PDE 抑制剂的历史，以及 PDE 同工酶及其分布）”Excerpta Medica，118 (1998)

鈴木秀謙: "RNAフィンガープリンティング法を用いた脳血管攣縮関連遺伝子の探索研究" 脳血管攣縮. 13. 272-276 (1998)

Hideken Suzuki：“利用RNA指纹法对脑血管痉挛相关基因的探索性研究”Cerebral Vasospasm 13. 272-276 (1998)。

Yuhei Nishimura: "Molecular Cloning and Characterization of Mammalian Homologues of Vesicle-Associated Membrane Protein-Associated(VAMP-Associated)Proteins" Biochem.Biophys.Res.Commun.254. 21-26 (1999)

Yuhei Nishimura：“囊泡相关膜蛋白相关（VAMP 相关）蛋白质的哺乳动物同源物的分子克隆和表征”Biochem.Biophys.Res.Commun.254。

Terumasa Mino: "Two distinct actin-binding sites of smooth muscle calponin" European Journal of Biochemistry. 251. 262-268 (1998)

Terumasa Mino：“平滑肌钙调蛋白的两个不同的肌动蛋白结合位点”欧洲生物化学杂志。