トランスジェニックマウスを用いたCbfa1の組織別機能解析

使用转基因小鼠对 Cbfa1 进行组织特异性功能分析

• 批准号: 12028224
• 负责人: 小守 壽文
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12028224/
• 关键词: Cbfa1; トランスジェニックマウス; 軟骨細胞; 永久軟骨; 骨芽細胞; 軟骨性骨化; 骨形成; 転写因子

生体内でCbfa1が軟骨細胞の分化にどのように働いているかを明らかにするために、軟骨細胞に特異的に発現するII型コラーゲンプロモーター・エンハンサーを用いたCbfa1トランスジェニックマウス(Tg)を作製した。Cbfa1にはN末端の異なる2つのアイソフォーム(I型、II型)があるため、これらのアイソフォームに対しそれぞれTgを作製した。同時にCbfa1の機能を抑制するために、DNA結合ドメインのみを持つドミナントネガティブ型Cbfa1Tgも作製した。これらのTgは全て出生直後に呼吸できずに死亡した。Cbfa1Tgでは、I型、II型とも軟骨細胞は早期から成熟肥大化し、骨に置き換えられる所謂内軟骨性骨化が促進し、逆にDN Cbfa1Tgでは、軟骨細胞の成熟及び内軟骨性骨化が抑制された。したがって、Cbfa1は骨芽細胞分化因子であるとともに軟骨細胞の分化因子であることを証明することができた。また、II型Cbfa1TgはI型Cbfa1Tgより強い表現型を示したが、機能的な差異は認めなかった。Cbfa1Tgでは、本来永久軟骨になるべき軟骨をも成長軟骨化しており、ほとんどの関節は癒合していた。逆にDNCbfa1Tgでは、本来の成長軟骨でも永久軟骨の形質を保持していた。したがって、Cbfa1は成長軟骨と永久軟骨の性格を決定づける上でも重要な働きをしていることを明らかにできた。

Born in vivo で Cbfa1 が cartilage cells の に ど の よ う に 働 い て い る か を Ming ら か に す る た め に, cartilage cells に specific に 発 now す る II コ ラ ー ゲ ン プ ロ モ ー タ ー · エ ン ハ ン サ ー を with い た Cbfa1 ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス (Tg) を cropping し た. Cbfa1 に は N terminal の different な る 2 つ の ア イ ソ フ ォ ー ム (type I and type II) が あ る た め, こ れ ら の ア イ ソ フ ォ ー ム に し seaborne そ れ ぞ れ Tg を cropping し た. At the same time に Cbfa1 の function を inhibit す る た め に, DNA binding ド メ イ ン の み を hold つ ド ミ ナ ン ト ネ ガ テ ィ ブ type Cbfa1Tg も cropping し た. <s:1> れら <s:1> Tg て all て after birth に breathing で ずに ずに ずに death た た. Cbfa1Tg で は, type I and type II と も chondrocytes は early か ら mature fat russsian し, bone に き in え ら れ る cartilaginous ossification within the so-called が promote し, inverse に DN Cbfa1Tg で は の, cartilage cells mature and び cartilaginous ossification が inhibit さ れ た. し た が っ て, Cbfa1 は bone bud differentiation factor で あ る と と も に の cartilage cell differentiation factor で あ る こ と を prove す る こ と が で き た. ま た, type II Cbfa1Tg は type I Cbfa1Tg よ り strong い phenotype を shown し た が, functional difference な は め な か っ た. Cbfa1Tg で は, originally a permanent cartilage に な る べ き cartilage を も growth chondrification し て お り, ほ と ん ど の masato section は healing し て い た. Reverse にDNCbfa1Tgで, the original <s:1> growth cartilage で <s:1> permanent cartilage <s:1> shape and quality を maintain <s:1> て て た た た た た. し た が っ て, Cbfa1 は と permanent cartilage growth cartilage の character を determines づ け る on で も important な 働 き を し て い る こ と を Ming ら か に で き た.

项目成果

Komori,T.: "A fundamental transcription factor for bone and cartilage."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 276. 813-816 (2000)

小森 T.：“骨和软骨的基本转录因子。”Biochem.Biophys.Res.Commun.. 276. 813-816 (2000)

Ueta,C.,: "Skeletal malformations caused by overexpression of Cbfa1 or its dominant negative form in chondrocytes."J.Cell Biol.. (in press).

Ueta,C.,：“软骨细胞中 Cbfa1 或其显性失活形式的过度表达引起的骨骼畸形。”J.Cell Biol..（出版中）。

Komori,T.: "Recent Research Development in Molecular & Cellular Biology,"S.G.Pandalai ed.(Research Signpost)(in press.).

Komori,T.：“分子生物学的最新研究进展

Kobayashi,H.,: "Multilineage differentiation of Cbfa1-deficient calvarial cells in vitro."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 273. 630-636 (2000)

Kobayashi, H.,：“Cbfa1 缺陷颅骨细胞的体外多系分化。”Biochem.Biophys.Res.Commun.. 273. 630-636 (2000)

Ikegame,M.,: "Tensile stress induces bone morphogenetic protein 4 (BMP-4) in preosteoblastic and fibroblastic cells, which later differentiate into osteoblasts leading to osteogenesis in the mouse calvariae in organ culture."J.Bone Miner.Res.. 16. 24-32 (

Ikegame，M.，：“拉伸应力会在前成骨细胞和成纤维细胞中诱导骨形态发生蛋白 4 (BMP-4)，随后分化为成骨细胞，导致器官培养中小鼠颅骨的成骨。”J.Bone Miner.Res..