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末梢神経接着糖蛋白質に見い出された新規糖鎖の生物学的意義

周围神经粘附糖蛋白中发现的新型糖链的生物学意义

基本信息

批准号：
12033221
负责人：
遠藤玉夫
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Institute of Gerontology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

末梢神経で見つけたラミニン結合活性を有し哺乳動物では珍しいOマンノシル型糖鎖について、生合成経路の解明を目指した。まず、マンノースを蛋白質に付ける酵素活性の検出方法について検討した。この酵素について研究が進んでいる酵母では、合成ペプチドをアクセプターとして容易に転移活性が測定できるが、哺乳動物の組織や細胞を酵素源として調べても、同様の方法では活性がうまく検出できなかった。そこでもともと我々がOマンノシル型糖鎖を見つけたジストログリカンの一部を改変してアクセプターとして使用すると、酵素活性が検出できることが判明した。この結果は、マンノースをペプチドに転移する反応でも、酵母と哺乳類では異なる性質の酵素によって担われている可能性を示唆している。次にマンノース転移に引き続いて起こるN-アセチルグルコサミン転移反応について検討した。合成したマンノシルペプチドを基質としラット脳を酵素源にして、N-アセチルグルコサミンをβ1→2結合で転移する酵素活性を検出することに成功した。この活性は、金属イオンとしてマンガンを要求した。N-アセチルグルコサミンβ1→2転移酵素については、すでにN型糖鎖の生合成に係わるGnT-IおよびGnT-IIが知られているが、我々が見つけた酵素はその両者とも異なる新らしい酵素であることが判明した。また、ラット脳以外について調べてみると、ウシ脳、ブタ脳、および骨格筋細胞とシュワノーマ細胞で酵素活性の存在を確認した。さらに、本酵素の遺伝子クローニングに成功し、遺伝子を発現させ本遺伝子が酵素活性を担うことを確認した。

In mammals, there is a combination of activity in the peripheral nervous system, and the understanding of the biosynthesis pathway is indicated. The method of detecting enzyme activity in protein is discussed in detail. The enzyme research has been advanced in yeast, synthetic and easy to detect, mammalian tissues and cells, enzyme source and regulation, and the same method of reverse activity. A part of the enzyme chain was found to be active in the enzyme chain, and the enzyme chain was found to be active in the enzyme chain. The results showed that yeast and mammalian enzymes could be used in different ways. N-S-S The enzyme activity was successfully detected by the enzyme source, N-type enzyme, β1 - 2-type enzyme and β 2-type enzyme. The activity of the metal is very important. N-type carbohydrate synthesis system GnT-I and GnT-II are known to be involved in the synthesis of N-type carbohydrate. The presence of enzyme activity in cells other than muscle cells was confirmed. In addition, the gene expression of this enzyme was successfully detected, and the gene expression was confirmed.