転写統合装置複合体機能調節によるHIV発現制御機構の解明

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わたしたちはCREB結合タンパク質(CBP)に代表される転写統合装置と呼ばれる分子群の解析をしている。特に、RNAヘリケースA(RHA)がCBPの転写活性化に必要であることを証明した(Cell 1996&1997,G＆D 1997)。HIVの発現調節領域TARに結合する宿主因子TRBP、PKRに保存されているRNA結合モチーフとRHAのそれとの相似性より,私たちはRHAのTAR機能への関与について以下の方法で検証した。その結果、RHAはそのRNA結合モチーフを介してTARと試験管内、細胞内で結合することが明らかになった。また、同モチーフの236番のリジン残基をグルタミン酸に置換した変異体(K236E)ではTARに対する親和性が有意に低下していることも証明された。さらに、鹿児島大学・馬場昌範教授との共同研究によりHIVの発現をルシフェラーゼアッセイ、ノザン法、またウイルス量をp24の定量法にて測定した結果、野生型RHAはHIVウイルス発現を転写レベルで活性化するが、K236E変異体、およびATPase活性の欠損した変異体ではこの作用が認められなかった。これらの結果をもとに、RHAをATPase/ヘリケース様因子としては最初のTARを介したHIV発現にかかわる宿主因子であることを報告した(FujiiらJ.Biol.Chem.2001)。今後、RHA/TAR複合体機能を詳細に解析することによりHIVの発現制御法の開発への礎としたい。