PD-1による免疫応答制御と自己免疫病の治療

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本研究は、PD-1遺伝子の破壊マウス(PD-1ko)に見られる自己免疫性の拡張型心筋症の病態を明らかにし、ヒト拡張型心筋症に於いても同様の機序が関与するか否かを明らかにする事を目的とする。その為、同疾患モデルに出現する自己抗体が認識する心臓の33kdの自己抗原を同定解析すべく精製を進めた。まず疾患マウスの血清が特異的にラット心臓の騒動蛋白を認識する事を確認した後、約100匹の正常ラット心臓抽出液から数種のカラムクロマトグラフィーにより抗原を約1000倍以上濃縮、同定した。本疾患マウスにおいては、IgG型の高親和性自己抗体の出現が認められる。その意義を直接証明する為に、PD-1koマウスにおいて、抗体のクラススイッチ及び親和性亢進能に必須の蛋白AIDの活性を欠失、減弱させた上で、拡張型心筋症発症の時期、症状の重症度に影響するかを検討する事が重要である。AID活性を制御するため、低活性型や優勢抑制型のAID変異体を見つける目的で、2型高IgM症候群患者からクローニングした変異型AIDのクラススイッチ誘導活性を、AID欠損マウス脾臓細胞の培養系で検定した。調べた13種の変異体全例に於いてほぼ完全に活性が失われていた。個々の変異体を比較すると、デアミナーゼモチーフのあるドメインの変異は勿論それ以外の様々な領域の変異でもAIDのクラススイッチ活性を不活化することが明かとなった。興味深いことに、そのうち2クローンに関しては、優勢抑制型の効果が認められた。これらは、AID活性制御に有用な分子であるのみならず、AIDの分子レベルでの反応機構を考察する上でも多量体形成を示唆する重要な分子である。実際に、2種類のTagを用いた免疫沈降法で多量体の形成を明らかにした。AIDで認められる線維芽細胞に対する体細胞突然変異誘導活性を同時に測定した結果、1つのクローンにおいて野生型のおよそ半分程度の効率の突然変異を検出した。この変異体のクラススイッチ活性は検出感度以下であることから、この変異体を用いて抗体のクラススイッチ能のみ欠損するマウスを作出できる可能性があり、今後IgG型へのスイッチが自己免疫病の病態にどのような役割を演じているか明らかにできると思われる。