Fynが結合する新しいカドヘリン様蛋白質

Fyn 结合的一种新的钙粘蛋白样蛋白

• 批准号: 13216063
• 负责人: 濱田 俊
• 金额: $ 4.86万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13216063/
• 关键词: チロシンキナーゼ; カドヘリン; 遺伝子; 生体分子; 生理活性

本年度は1)CNR遺伝子欠損マウスの作製とその組織構築異常の解析、2)CNR蛋白質細胞内領域に結合する分子の同定、3)がん化細胞株におけるCNRファミリー分子の発現解析を行った。1)本年度、CNR-AおよびCNR-B alternative formに固有な領域を選択的に欠損させたターゲッティングマウスの作成に成功した。CNR-AホモマウスではCNR-Aに固有な領域を欠失した蛋白質が生じていることを免疫沈降法およびイムノブロット法により確認した。またCNR-Bホモマウスでは、Splicing siteの近傍にネオマイシン耐性遺伝子が挿入されたため、CNR-B alternative splicing formが選択的に欠失していることが明らかになった。これらのマウスについて外観上の形態学的、行動学的異常を観察したが、現在までのところ顕著な異常は見いだされていない。両ホモ欠損マウスは雄および雌とも繁殖可能であり、現在C57BL/6マウスに戻し交配を行いつつ、解析を進めている。2)yeast-two hybrid法を用いて行ったCNR蛋白質細胞内領域と相互作用する分子のスクリーニングでは、3種類のライブラリーを用いてスクリーニングを行い、セリン/スレオニンキナーゼなど2種類の候補遺伝子が得られた。今後さらにスクリーニングを行うと共に、得られた候補遺伝子に関してはin vivoでの複合体形成の確認、結合領域の決定を行いたい。3)がん化細胞株におけるCNRファミリーの発現をRT-PCR法により検索したが、neuroblastoma, pheochromocytoma, melanoma由来のがん化細胞株においてCNRのmRNAの発現がみられることが明らかになった。今後さらに多数の株についてスクリーニングを行うと共に、これらがん化細胞に発現しているCNRのmRNA、蛋白質の構造異常について検討したい。

This year, we conducted 1) analysis of histomorphological abnormalities in CNR gene damage, 2) molecular identification of CNR protein binding in intracellular domain, and 3) molecular analysis of CNR gene expression in cultured cell lines. 1) This year, CNR-A and CNR-B alternative forms are selected successfully. CNR-A is a natural domain that lacks protein and is identified by immunosedimentation. CNR-B alternative splicing form is used to select the correct Splicing site. The morphological and kinematic anomalies on the outside are observed, and the anomalies on the outside are observed. C57BL/6 is a new breed of male and female. 2) The yeast-two hybrid method is used to carry out the CNR protein intracellular domain interaction. 3 kinds of protein are used to carry out the CNR protein intracellular domain interaction. 2 kinds of candidate proteins are used to carry out the CNR protein intracellular domain interaction. In the future, the identification of complex formation and the determination of binding domain will be carried out in the middle of the process. 3) Detection of CNR mRNA expression in cultured cell lines by RT-PCR, neuroblastoma, pheochromocytoma, melanoma. In the future, most of the strains will be detected in the presence of CNR mRNA and protein structural abnormalities.

项目成果

Yamazaki Y, Makino H, Hamaguchi-Hamada K, Hamada S.Sugino H, Kawase E, Miyata T, Ogawa M, Yanagimachi R, Yagi, T.: "Assessment of the developmental totipotency of neural cells in the cerebral cortex of mouse embryo by nuclear transfer"Proc Natl Acad Sci U

Yamazaki Y，Makino H，Hamaguchi-Hamada K，Hamada S.Sugino H，Kawase E，Miyata T，Okawa M，Yanagimachi R，Yagi，T.：“小鼠胚胎大脑皮层神经细胞发育全能性的评估

Hamada S, Yagi T.: "The cadherin-related neuronal receptor (CNR) family : a novel diversified cadherin family at the synapse"Neuroscience. Res.. 41. 207-215 (2001)

Hamada S、Yagi T.：“钙粘蛋白相关神经元受体 (CNR) 家族：突触处的新型多样化钙粘蛋白家族”神经科学。