シナプス形成におけるカドヘリン型受容体CNRファミリーの機能解析

钙粘蛋白型受体CNR家族在突触形成中的功能分析

• 批准号: 12780564
• 负责人: 濱田 俊
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12780564/
• 关键词: Cadherin-related Neuronal Receptor; CNR; シナプス形成; 遺伝子クラスター; カドヘリン; 蛋白質局在解析

カドヘリン型受容体CNRは免疫系多様化受容体と類似の遺伝子クラスター構造を有するカドヘリンファミリーであり、その蛋白質はシナプスに存在することが示唆されている。本研究では1)CNR蛋白質の脳内での局在を明らかにすること、2)神経細胞培養系おけるCNR機能阻害抗体のシナプス形成に及ぼす影響を検討することを目的とした。(方法)昨年度までにCNR1アミノ末端部に対するポリクローナル抗体、CNR-AおよびCNR-B型抗体を得ていたが、さらに今年度はCNR1アミノ末端部に対するモノクローナル抗体4F11が得られた。4F11はイムノブロット法、免疫染色などで特異性が確認され、良好な染色結果が得られたため、この抗体を用いた蛍光抗体法によりマウス小脳発生過程におけるCNR蛋白質の発現・局在変化を検討した。また、静置界面培養法により、小脳スライス標本の培養を行い、CNR1-EC1ドメインを有する分泌型CNRを投与し、その効果を検討した。(結果・考察)イムノブロツト法によりCNR蛋白質の経時的発現変化を検討したところ、生後7〜14日目に発現量が最大となり、その後次第に減少することが明らかになった。この時期に免疫染色を行ったところ、形成されつつある分子層で強い免疫反応が観察された。小脳分子層でのシナプス形成はプルキンエ細胞層側から軟膜方向に向かい進行するが、CNRの発現はシナプス小胞蛋白質synaptophysinの発現よりもやや先行する領域で強く発現し、シナプス形成早期にCNR蛋白質が動員されることが示唆された。一方、静置界面培養法による小脳スライス培養にCNR1-EC1分泌型CNRを投与したが、スライス標本の品質が実験毎にばらつくため、定量的な結果を得ることが困難であることが判明し、より定量的なデータを得やすいと思われる分散培養法に変更して実験を行う予定である。

The type of CNR immunized multi-immunized recipient is similar to that of the immunized recipient, which is similar to that of the child. In this study, 1) CNR protein was detected in the laboratory, and 2) the cell culture system CNR could block the formation of antibodies and affect the formation of antibodies. (methods) Last year, the end of the CNR1 was infected by antibody, the antibody of CNR-A was detected by the antibody of CNR- B, and the antibody of 4F11 was obtained by the end of the year. (methods) last year, the end of the virus was infected by the antibody, the antibody and the antibody. 4F11 immunostaining assay, immunostaining, immunostaining, immunostaining, The method of static interface training, the method of static (the results of the investigation) the results showed that the CNR protein was detected during the incubation period, the maximum dose was obtained on the 7th and 14th day after birth, and the second test was performed on the second day. Double immunostaining was performed in every period of time, and a strong immunoreactive antibody was formed to detect the immune response. In the early stage of the formation of the cell membrane, the CNR protein is activated in the early stage of the formation of the cell membrane. The small molecule is formed in the direction of the cell membrane in the direction of the cell membrane, and the CNR protein is activated in the early stage of the formation. On the one hand, the static interface culture method was used to detect the expression of CNR1-EC1 secretory CNR, and the quantitative results showed that there were significant differences between the two groups, and the quantitative results showed that there were significant differences between the two groups, and the quantitative results showed that there were significant differences between the two groups.

项目成果

Yamazaki Y, Makino H, Hamaguchi-Hamada K, Hamada S.Sugino H, Kawase E, Miyata T, Ogawa M, Yanagimachi R, Yagi, T.: "Assessment of the developmental totipotency of neural cells in the cerebral cortex of mouse embryo by nuclear transfer"Proc Natl Acad Sci U

Yamazaki Y，Makino H，Hamaguchi-Hamada K，Hamada S.Sugino H，Kawase E，Miyata T，Okawa M，Yanagimachi R，Yagi，T.：“小鼠胚胎大脑皮层神经细胞发育全能性的评估

Takei Y.: "Two novel CNRs from the CNR gene cluster have molecular features distinct from those of CNR 1 to 8"Genomics,. 73(in press). (2001)

Takei Y.：“CNR 基因簇中的两个新 CNR 具有与 CNR 1 至 8 不同的分子特征”Genomics，。

Hamada S, Yagi T.: "The cadherin-related neuronal receptor (CNR) family : a novel diversified cadherin family at the synapse"Neuroscience. Res.. 41. 207-215 (2001)

Hamada S、Yagi T.：“钙粘蛋白相关神经元受体 (CNR) 家族：突触处的新型多样化钙粘蛋白家族”神经科学。