チロシンリン酸化を介したシナプス前制御機構に関する研究

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培養したラット小脳顆粒細胞に1μMのIonomycinを2分間作用させ、細胞内へのCa^<2+>流入を引き起こすと顕著なグルタミン酸の放出が誘発された。この際、予め小脳顆粒細胞をタンパク質チロシンホスファターゼの阻害剤であるPTPi-1で10分間前処理しておくと、濃度依存的にIonomycin誘発性のグルタミン酸放出が抑制された。PC12細胞からのドーパミン放出もPTPi-1で抑制された。PTPi-I未処理の状態でPC12細胞のタンパク質を、抗リン酸化チロシン抗体を用いてイムノブロット解析すると、約116-136kDa付近に3本のチロシンリン酸化バンドが認められた。Ionomycin 1μM2分間作用させるとこれらのバンドは認められなくなり、Ca^<2+>依存的な脱リン酸化を受けることが明らかとなった。この際予め細胞をPTPi-1 100μMで2min前処理をしておくと、これらのCa^<2+>依存的な脱リン酸化は顕著に抑制された。しかしPTPi-1の前処理を10minを行った場合にもリン酸化バンドがみられなくなり、Ca^<2+>非依存的な機構によっても脱リン酸化が起こることが考えられた。この場合引き続きIonomycin 1μMで2分間刺激すると、約116-136kDa付近に3本のチロシンリン酸化バンドが再び認められた。イムノブロット解析から116kDaおよび125kDaのタンパク質はそれぞれPyk2およびFAKであることが明らかとなった。