チロシンリン酸化を介したシナプス前制御機構に関する研究

酪氨酸磷酸化介导的突触前控制机制研究

• 批准号: 02F00549
• 负责人: 高橋 正身
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02F00549/
• 关键词: 神経伝達物質; チロシンリン酸化; チロシンキナーゼ; チロシンホスファターゼ; PC12細胞; シナプス可塑性

培養したラット小脳顆粒細胞に1μMのIonomycinを2分間作用させ、細胞内へのCa^<2+>流入を引き起こすと顕著なグルタミン酸の放出が誘発された。この際、予め小脳顆粒細胞をタンパク質チロシンホスファターゼの阻害剤であるPTPi-1で10分間前処理しておくと、濃度依存的にIonomycin誘発性のグルタミン酸放出が抑制された。PC12細胞からのドーパミン放出もPTPi-1で抑制された。PTPi-I未処理の状態でPC12細胞のタンパク質を、抗リン酸化チロシン抗体を用いてイムノブロット解析すると、約116-136kDa付近に3本のチロシンリン酸化バンドが認められた。Ionomycin 1μM2分間作用させるとこれらのバンドは認められなくなり、Ca^<2+>依存的な脱リン酸化を受けることが明らかとなった。この際予め細胞をPTPi-1 100μMで2min前処理をしておくと、これらのCa^<2+>依存的な脱リン酸化は顕著に抑制された。しかしPTPi-1の前処理を10minを行った場合にもリン酸化バンドがみられなくなり、Ca^<2+>非依存的な機構によっても脱リン酸化が起こることが考えられた。この場合引き続きIonomycin 1μMで2分間刺激すると、約116-136kDa付近に3本のチロシンリン酸化バンドが再び認められた。イムノブロット解析から116kDaおよび125kDaのタンパク質はそれぞれPyk2およびFAKであることが明らかとなった。

Cultivate し た ラ ッ ト small 脳 granulosa cells に 1 mu M の Ionomycin を role between two points さ せ, intracellular へ の Ca ^ < 2 + > lead into を き up こ す と 顕 the な グ ル タ ミ の ン acid release が 発 lure さ れ た. こ の interstate, small to め 脳 granulosa cells を タ ン パ ク qualitative チ ロ シ ン ホ ス フ ァ タ ー ゼ の resistance against tonic で あ る で PTPi - 1 before 10 points between 処 Richard し て お く と, concentration dependent に Ionomycin 発 sex lure の グ ル タ ミ ン acid released が control さ れ た. PC12 cells ら ら ド ド パ パ パ パ パ ド <s:1> release <s:1> PTPi-1で inhibition された. PTPi -i did not 処 Richard の state で PC12 cells の タ ン パ ク qualitative を, resisting リ ン acidification チ ロ シ を ン antibody with い て イ ム ノ ブ ロ ッ ト parsing す る と, about 116-136 kda 3 pay nearly に の チ ロ シ ン リ ン acidification バ ン ド が recognize め ら れ た. Ionomycin 1 mu role between M2 points さ せ る と こ れ ら の バ ン ド は recognize め ら れ な く な り, Ca ^ < 2 + > dependent な リ off ン acidification を by け る こ と が Ming ら か と な っ た. こ の interstate to め cells を PTPi - 1 100 microns で 2 min ago 処 Richard を し て お く と, こ れ ら の Ca ^ 2 + > < dependent な リ off ン acidification は 顕 the に inhibit さ れ た. し か し PTPi - 1 before の 処 him を line 10 min を っ た occasions に も リ ン acidification バ ン ド が み ら れ な く な り, Ca ^ 2 + > < not dependent な institutions に よ っ て も リ off ン acidification が up こ る こ と が exam え ら れ た. こ の occasions led き 続 き Ionomycin 1 mu M で between two points to stimulate す る と, about 116-136 kda 3 pay nearly に の チ ロ シ ン リ ン acidification バ ン ド が び again to recognize め ら れ た. イ ム ノ ブ ロ ッ ト parsing か ら 116 kda お よ び 125 kda の タ ン パ ク qualitative は そ れ ぞ れ Pyk2 お よ び FAK (で あ る こ と が Ming ら か と な っ た.

项目成果

H.Higashi: "Ganglioside/protein kinase signals triggering cytoskeletal actin reorganization."Glycoconj J.. 20. 49-58 (2003)

H.Higashi：“神经节苷脂/蛋白激酶信号触发细胞骨架肌动蛋白重组。”Glycoconj J.. 20. 49-58 (2003)