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アルツハイマー病発症機構におけるプレセニリンとγセクレターゼの機能解析

早老素和γ-分泌酶在阿尔茨海默病发病机制中的功能分析

基本信息

批准号：
15689002
负责人：
富田泰輔
金额：
$ 9.24万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15689002/
关键词：
アルツハイマー βアミロイドプレセニリン

项目摘要

γ-セクレターゼはAPPの膜内配列を切断し、アルツハイマー病発症に深く関連するβアミロイド蛋白の最終段階を担う酵素である。その分子的本態として、家族性アルツハイマー病原因遺伝子の一つであるPresenilinを活性中心とした、Nicastrin(Nct)、Aph-1、Pen-2によって構成される高分子量膜蛋白複合体であることが明らかとなっている。特異的な阻害剤の開発やその高次構造の理解のためには、活性を持つ酵素の高効率な発現・精製法の確立が必須であるが、複数の膜蛋白によって構成される複合体という特性のため、通常の発現系では困難であった。そこでバキュロウイルス発現系において、感染Sf9細胞から出芽するウイルスに活性を持つ膜蛋白複合体が効率よく濃縮されるという現象を利用することを考え、4分子それぞれをコードするリコンビナントバキュロウイルスを作製し、Sf9細胞に感染させた(東大・先端研、浜窪・児玉教授との共同研究)。その結果4分子すべくを感染させたときに初めて活性型γ-セクレターゼ複合体がSf9細胞膜画分および出芽ウイルス画分に再構成され、その酵素学的性質は哺乳類細胞のそれとほぼ同様であった。さらにSf9細胞には不活性型γ-セクレターゼをあらわすと考えられる全長型PSが多く存在していたのに対し、出芽ウイルス画分には活性型γ-セクレターゼの特異的な集積が観察された。この方法により活性型γ-セクレターゼを特異的に産生・精製することが可能となったほか、多種の膜結合性サブユニットからなる高分子量膜蛋白複合体を効率よく再構成することが可能となることが示唆された。

The membrane of APP was arranged with "cut off", "cut", "disease", "deep", "β", "protein", "enzyme", "enzyme" in the membrane. The molecular homeostasis, familial etiology, Presenilin active center, Nicastrin (Nct), Aph-1, and Pen-2 antigens were transformed into high molecular weight membrane protein complexes (HMW-MMPs). It is necessary to determine the characteristics of the membrane protein complex by the high-frequency purification method, which is used to determine the characteristics of the membrane protein, the complex membrane protein, the complex membrane protein, the enzyme, the enzyme. The results showed that the infection rate of membrane protein complex was higher than that of the control group, the infection rate of membrane protein complex was higher than that of the control group, and the infection rate of Sf9 cells was significantly higher than that of the control group (P < 0.05). The results showed that the infection rate of membrane protein complex was significantly higher than that of the control group. The joint study of Hamamatsuki, professor Yu. Results the results showed that 4 molecules were infected in mammalian cells. The active gamma-globulin complex, Sf9 cell membrane painting, sprouting, cell membrane painting, zymography and zymography were used in this study. The inactive Sf9 cells show that the full-length PS cells have the characteristics of active gamma-ray particles, and the sprouting cells are not active. In this method, it is possible to detect the complex of high molecular weight membrane proteins (HMW-MMPs) in the seminiferous seminiferous products of active gamma-ray products and the combination of multiple membranes.