2プロモーター型ベクターを利用した遺伝子治療の分子イメージング法の開発

使用2-启动子载体开发基因治疗的分子成像方法

• 批准号: 17790857
• 负责人: 清野 泰
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: University of Fukui (2006)Kyoto University (2005)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790857/
• 关键词: 遺伝子発現イメージング; レポーター遺伝子; 分子イメージングプローブ; 核医学診断; 心不全; 放射性薬剤

遺伝子治療における導入遺伝子の発現を非侵的に評価する方法の開発を目的として、「2プロモーター型ベクター」という新しい戦略のもとに、心不全の治療遺伝子を導入し、その遺伝子の発現を非侵襲的にイメージングすることを計画した。本年度は、引き続き治療遺伝子として心臓のβ受容体のシグナル伝達を脱感作するGタンパク質共役型受容体キナーゼ(GRK)を阻害するβARKctを、レポーター遺伝子として1塩基置換したdopamine trnasporter(mDAT)を同時に発現する2-プロモーター型ベクターの構築及び構築したベクターのインビトロ実験系での評価を行った。まずラットの心臓及び脳よりβARKctとDAT遺伝子のcDNAを作製した。次いで、両遺伝子を2-プロモーター型ベクターに挿入することにより、両タンパク質を同時に発現する2-プロモーター型ベクターを構築した。さらに、臨床への応用を考え、DATを細胞に発現させたときにdopamineを細胞内に取り込み生理反応を引き起こさないようにするために、dopamineの取込能を消失させたmDATの作製も行った。DATアミノ酸配列中、101番目のプロリンをアラニンに変換する点変異を導入することによりmDATを作製した。構築したベクターをHEK293細胞に導入し、インビトロ実験系における検討を行った。その結果、βARKctとmDATタンパク質の発現をwesternblot法により確認できた。さらに構築したベクターを導入した細胞においてβ受容体のシグナル伝達を阻害できること、dopamine取込能が消失していることを確認した。さらにDATに対する分子イメージングプローブの結合能が維持されていることも確認した。本ベクターを用いることにより、インビボにおいて心木全治療と治療遺伝子の発現をイメージングできる可能性が示唆された。

Heritage 伝 son treatment に お け る import legacy 伝 son の 発 presently を not invade に review 価 す る method の open 発 を purpose と し て, "2 プ ロ モ ー タ ー type ベ ク タ ー" と い う new し い 戦 slightly の も と に, incomplete heart の treatment heritage 伝 を import し, そ の heritage 伝 son の 発 now を of noninvasive に イ メ ー ジ ン グ す る こ と を project し た. は this year, led き 続 き treatment heritage 伝 son と し て heart perforatien の beta by let body の シ グ ナ ル 伝 da を off feeling as す る G タ ン パ ク type total service quality by the capacity of body キ ナ ー ゼ (GRK) を resistance against す る beta ARKct を, レ ポ ー タ ー heritage 伝 son と し て 1 salt base displacement し た dopamine Trnasporter (mDAT) を に 発 now す る 2 - プ ロ モ ー タ ー type ベ ク タ ー の constructs and び build し た ベ ク タ ー の イ ン ビ ト ロ be 験 department で の review 価 を line っ た. The cDNA of まずラット in the heart and び脳よ び脳よ β -arkct とDAT remains 伝 is を for the preparation of た た. Time い で, struck but 伝 を 2 - プ ロ モ ー タ ー type ベ ク タ ー に scions into す る こ と に よ り, struck タ ン パ ク を quality at the same time に 発 now す る 2 - プ ロ モ ー タ ー type ベ ク タ ー を build し た. さ ら に, clinical へ の 応 tested え, DAT in を を cells に 発 now さ せ た と き に dopamine を intracellular に take り 込 み physiological anti 応 を lead き up こ さ な い よ う に す る た め に, dopamine の can take 込 を disappear さ せ た mDAT の cropping も line っ た. DAT ア ミ ノ acid column, 101's mesh の プ ロ リ ン を ア ラ ニ ン に variations in す る points - different を import す る こ と に よ り mDAT を cropping し た. The construction of <s:1> たベ タ タ を を をHEK293 cells に was introduced into the における検 and <s:1> ビトロ ビトロ laboratory for における検 to discuss を and った. The results of そ そ, βARKctとmDATタ <s:1> パ mass images, をwesternblot によ た, confirmed で た た. さ ら に build し た ベ ク タ ー を import し た cells に お い て beta by let body の シ グ ナ ル 伝 da を resistance against で き る こ と, dopamine can take 込 が disappear し て い る こ と を confirm し た. Molecular イ さ ら に DAT に す seaborne る メ ー ジ ン グ プ ロ ー ブ の binding energy が maintain さ れ て い る こ と も confirm し た. This ベ ク タ ー を with い る こ と に よ り, イ ン ビ ボ に お い て heart wood all treatment と heritage 伝 son の 発 now を イ メ ー ジ ン グ で き が る possibility in stopping さ れ た.

项目成果

Synthesis and evaluation of radioiodinated (S,S)-2-(alpha-(2-iodophenoxy)benzyl)morpholine for imaging brain norepinephrine transporter.

用于脑去甲肾上腺素转运蛋白成像的放射性碘化 (S,S)-2-(α-(2-碘苯氧基)苄基)吗啉的合成和评价。

• 发表时间: 2006
• 期刊: European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging 33・6
• 作者: 小坂信之;他;Yasushi Kiyono;Yasushi Kiyono
• 通讯作者: Yasushi Kiyono

Vla Vasopressin receptors maintain normal blood pressure by regulating circulating blood volume and baroreflex sensitivity.

Vla 加压素受体通过调节循环血量和压力反射敏感性来维持正常血压。

• 期刊: Proc.Natl.Acad.Sci.USA. (印刷中)
• 作者: M.Isaji et al.;H.Wang et al.;N.Yamada et al.;H.Ueno et al.;H.Tanahashi et al.;Okuno Y;Adachi T;Ishida A;Hosoda C;Zhu S;Lazaro-Suarez ML;Kagaya S;Zacharia J;Sugimoto Y;Nagata N;Egashira N;Kagaya S;Chen Q;Erami C;Katsuma S;Adachi T;Katsuma S;Yamada M;Yamauchi J;Hosoda C;Adachi T;Katsuma S;Deighan C;Hirasawa A;Ami Y;Koshimizu T
• 通讯作者: Koshimizu T

GammadeltaT cells kill myeloma cells by sensing mevalonate metabolites and ICAM-1 molecules on cell surface.

GammadeltaT 细胞通过感知细胞表面的甲羟戊酸代谢物和 ICAM-1 分子来杀死骨髓瘤细胞。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Biochem Biophys Res Commun. 354・2
• 作者: 小坂信之;他;Yasushi Kiyono
• 通讯作者: Yasushi Kiyono