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2プロモーター型ベクターを利用した遺伝子治療の分子イメージング法の開発

使用2-启动子载体开发基因治疗的分子成像方法

基本信息

批准号：
17790857
负责人：
清野泰
金额：
$ 2.18万
依托单位：
University of Fukui (2006)Kyoto University (2005)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

遺伝子治療における導入遺伝子の発現を非侵的に評価する方法の開発を目的として、「2プロモーター型ベクター」という新しい戦略のもとに、心不全の治療遺伝子を導入し、その遺伝子の発現を非侵襲的にイメージングすることを計画した。本年度は、引き続き治療遺伝子として心臓のβ受容体のシグナル伝達を脱感作するGタンパク質共役型受容体キナーゼ(GRK)を阻害するβARKctを、レポーター遺伝子として1塩基置換したdopamine trnasporter(mDAT)を同時に発現する2-プロモーター型ベクターの構築及び構築したベクターのインビトロ実験系での評価を行った。まずラットの心臓及び脳よりβARKctとDAT遺伝子のcDNAを作製した。次いで、両遺伝子を2-プロモーター型ベクターに挿入することにより、両タンパク質を同時に発現する2-プロモーター型ベクターを構築した。さらに、臨床への応用を考え、DATを細胞に発現させたときにdopamineを細胞内に取り込み生理反応を引き起こさないようにするために、dopamineの取込能を消失させたmDATの作製も行った。DATアミノ酸配列中、101番目のプロリンをアラニンに変換する点変異を導入することによりmDATを作製した。構築したベクターをHEK293細胞に導入し、インビトロ実験系における検討を行った。その結果、βARKctとmDATタンパク質の発現をwesternblot法により確認できた。さらに構築したベクターを導入した細胞においてβ受容体のシグナル伝達を阻害できること、dopamine取込能が消失していることを確認した。さらにDATに対する分子イメージングプローブの結合能が維持されていることも確認した。本ベクターを用いることにより、インビボにおいて心木全治療と治療遺伝子の発現をイメージングできる可能性が示唆された。

The aim of the development of a method for the non-invasive evaluation of gene therapy is to develop a new method for the non-invasive evaluation of gene therapy. This year, we conducted an evaluation on the construction and development of a 2-level treatment receptor system for the simultaneous development of a treatment receptor and a dopamine receptor (mDAT) for the inhibition of βARKct and GRK. The cDNA of the DAT gene was produced from the cDNA of the ARKct gene. The second is the construction of a 2-position model for the simultaneous development of a 2-position model. In addition, the clinical application of dopamine, dopamine. DAT is controlled by the change of position in the acid sequence and the change of position. Construction of HEK293 cells for introduction, development and evaluation Results: βARKct and mDAT were identified by western blot. In addition, it was confirmed that the construction of the cell was blocked by the introduction of dopamine into the cell The binding energy of DAT molecules is maintained. This article discusses the possibility of using the "

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Synthesis and evaluation of radioiodinated (S,S)-2-(alpha-(2-iodophenoxy)benzyl)morpholine for imaging brain norepinephrine transporter.

用于脑去甲肾上腺素转运蛋白成像的放射性碘化 (S,S)-2-(α-(2-碘苯氧基)苄基)吗啉的合成和评价。

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging 33・6
影响因子：
0
作者：
小坂信之;他;Yasushi Kiyono;Yasushi Kiyono
通讯作者：
Yasushi Kiyono

Vla Vasopressin receptors maintain normal blood pressure by regulating circulating blood volume and baroreflex sensitivity.

Vla 加压素受体通过调节循环血量和压力反射敏感性来维持正常血压。

DOI：
发表时间：
期刊：
Proc.Natl.Acad.Sci.USA. (印刷中)
影响因子：
0
作者：
M.Isaji et al.;H.Wang et al.;N.Yamada et al.;H.Ueno et al.;H.Tanahashi et al.;Okuno Y;Adachi T;Ishida A;Hosoda C;Zhu S;Lazaro-Suarez ML;Kagaya S;Zacharia J;Sugimoto Y;Nagata N;Egashira N;Kagaya S;Chen Q;Erami C;Katsuma S;Adachi T;Katsuma S;Yamada M;Yamauchi J;Hosoda C;Adachi T;Katsuma S;Deighan C;Hirasawa A;Ami Y;Koshimizu T
通讯作者：
Koshimizu T

GammadeltaT cells kill myeloma cells by sensing mevalonate metabolites and ICAM-1 molecules on cell surface.

GammadeltaT 细胞通过感知细胞表面的甲羟戊酸代谢物和 ICAM-1 分子来杀死骨髓瘤细胞。