マクロファージの細胞内殺菌作用に関わるNF-IL6標的遺伝子の同定

巨噬细胞胞内杀菌作用相关NF-IL6靶基因的鉴定

• 批准号: 08877061
• 负责人: 審良 静男
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Hyogo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08877061/
• 关键词: NF-IL6; マクロファージ; ノックアウトマウス; M1細胞; サブトラクション; MIP-1a; CD14; オステオポンチン; 転写因子; 細胞内殺菌作用; リステリア; differential display

NF-IL6ノックアウトマウスは、少量のリステリア菌の腹腔内感染により死亡し、細胞内寄生細菌の感染に対して極めて弱い。このマウスのマクロファージは、取り込まれたリステリア菌を殺菌できず、細胞質内にリステリア菌がエスケープし分裂、増殖していた。マクロファージによる殺菌機構に重要なNO産生に異常はみられずNO非依存性の殺菌作用の存在があきらかとなった。マクロファージにおける殺菌機構にかかわるNF-IL6のターゲット遺伝子を同定するため、IPTG添加によりNF-IL6を発現誘導できる安定形質導入株をマウス骨髄性白血病細胞株M1において樹立し、NF-IL6誘導前後のmRNA間でサブトラクションをおこなった。Suppressive Subtractive Hybridization法を用いてサブトラクションライブラリーを作製し、1500クローンをスクリーニングした。その結果、既知の標的遺伝子であるhaptoglobin以外にMIP-1a,Osteopontin,CD14のmRNAがNF-IL6誘導後顕著に増大することが判明した。このうち、MIP-1aに関しては、転写開始点から175bp上流のプロモーター内にNF-IL6の結合配列が3ヵ所存在することおよびluciferase assayの結果から標的遺伝子であることが証明された。今後さらにスクリーニングをくりかえすことによりマクロファージにおける殺菌機構にかかわるNF-IL6のターゲット遺伝子を同定するつもりである。

NF-IL-6 is a very weak inhibitor of intracellular parasitic bacteria infection and death. This is the first time I've ever seen one of these things. The existence of NO independent mechanism NF-IL6 gene expression was determined by IPTG addition and induced by NF-IL6 gene expression. Suppressive Subtractive Hybridization is used to control the 1500-degree conversion process. The results showed that the mRNA levels of MIP-1a,Osteopontin, CD14 increased after induction of NF-IL6 except for haptoglobulin. The results of the NF-IL6 binding assay show that there are three binding sites in the NF-IL6 binding sequence from the 175bp upstream of the MIP-1a binding site. The NF-IL6 has been established by the Yangwei Organization.

项目成果

Minami,M.: "STAT3 activation is a critical step in gp130-mediated terminal differentiation and growth arrest of a myeloid cell line." Proc.Natl.Acad.Sci.,USA. 93. 3963-3966 (1996)

Minami,M.：“STAT3 激活是 gp130 介导的骨髓细胞系终末分化和生长停滞的关键步骤。”

Shi,W.: "The genomic structure and chromosomal localization of the mouse STAT3 gene." Int.Immunol.8. 1205-1211 (1996)

Shi,W.：“小鼠 STAT3 基因的基因组结构和染色体定位。”

Kawai,T.: "ZIP-kinase,a novel serin/threonine kinase which mediates apoptosis." Mol.Cell.Biol.(in press). (1998)

Kawai,T.：“ZIP 激酶，一种介导细胞凋亡的新型丝氨酸/苏氨酸激酶。”

Akira,S.: "NF-IL6 and NF-κB in cytokine gene regulation." Advances in Immunology. (in press). (1997)

Akira, S.：“细胞因子基因调节中的 NF-IL6 和 NF-κB。”（正在出版）。

Takeda,K.: "Targeted disruption of the mouse Stat3 gene leads to early embryonic lethality." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 94. 3801-3804 (1997)

Takeda,K.：“有针对性地破坏小鼠 Stat3 基因会导致早期胚胎死亡。”