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相同組換えによる特異的細胞除去システムの開発

利用同源重组开发特异性细胞去除系统

基本信息

批准号：
09877068
负责人：
斉藤隆
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、ある標的分子を発現する細胞を特異的に除去した動物を遺伝子ターゲティングによって作製する方法を樹立することを目指した。モデル系として、NK細胞レセプターの1つであるNKR-P1を選び、NK細胞とNKT細胞を除去したマウスの樹立を試みた。NKR-P1の代わりにジフテリア毒素遺伝子を発現させるために、NKR-P1ゲノム遺伝子の単離とマッピングを行い、その転写開始点を明らかにした後、転写開始点直下をジフテリア毒素で相同組換えによって置換させることのできるベクターを作製した。NKR-P1の発現するC57BL/6マウス由来のES細胞株BL6-IIIにこのベクターを導入し、特異的相同組換えを有する2つのES細胞クローンを樹立した。これらを凝集キメラ法およびインジェクション法の両者によって、Balb/cマウスのblastcystに導入し、キメラマウスを作製した。トキシン遺伝子が発現すればキメラマウスにおいても特異的細胞除去が可能であるので、キメラマウスの脾細胞を、ES細胞(H-2^b)とホスト(H-2^b)由来の細胞をMHCに対する抗体で区別して、ES細胞由来のT・B・NK細胞を解析した。対照群として親株のES細胞のみを導入したキメラマウスでは、キメリズムによらず、一定の割合(平均3.3%)でNK細胞が検出されたのに対し、相同組換えを有するES細胞由来のキメラマウスでは全くNK細胞が検出されなかった。これに対して、ES細胞由来(H-2^b)のT細胞・B細胞は、対照群のキメラマウスにおける割合と同程度であったことから、NK細胞が特異的に除去されていることが強く示唆された。細胞数が少ないため、NK活性が全くないか、については、今後の解析となった。これらから、目的としたNKR-P1を発現する細胞を特異的に除去することに成功することができた。本方法は、今後更に、分化における系列等、より一般的な解析に応用可能であると思われる。

In this study, the molecular markers of this study show that the cells are specially designed to remove the animals, the children, the animals, the animals, the eyes, the eyes. Please select the NKR-P1 option, the NK cell, the NKT cell, the NK cell, and the NKT cell to remove the error message. In the NKR-P1 system, you need to know that you are not in the market for toxins, and that you are not allowed to do so. After you have read the start point, you have to write the start point. After the start point is clear, you can write the start point directly. You can use the same system to detect toxins. In the same group, you need to make sure that you do not need to do so. The origin of C57BL/6 infection was found in NKR-P1. The cell line of ES cell, the cell strain of BL6-III, was imported into the cell, and the same tissue in the same cell line of BL6-III was found to be isolated from ES. The method of agglutination, the method of agglutination and so on. In this case, you can see that the cell removal of the specific cell is not possible. The spleen cell, the ES cell (H2 ^ b), the MHC antibody cell (H2 ^ b), and the ES cell (T, B, NK) are analyzed. According to the group, the ES cells were divided into the whole NK cells in the same group (3.3% on average). The origin of the ES cell (H2 ^ b), the cell B of the cell (H2 ^ b), the cell of the group (B), the cell of the NK cell (H2 ^ b), the cell of the group (H2 ^ b), the cell of the cell (H2 ^ b). The number of cells is small, the activity of NK is low, and the activity of DNA is low. The purpose of the NKR-P1 is to show that the cell has been removed successfully. This method, the future, the differentiation of the series, etc., and the general "analysis" may be used to think about it.