权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

T細胞活性化の一分子イメージング解析

T细胞激活的单分子成像分析

基本信息

批准号：
16659124
负责人：
斉藤隆
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

T細胞の抗原特異的な活性化において、活性化シグナルを伝達する重要な分子が集合して存在し、シグナル伝達の場であるlipid raftを可視化する目的で、lipid raft局在分子LATの細胞内ドメインをEGFPに置換したLAT-GFPを、アクチンプロモーターを用いて全身性に発現するトランスジェニックマウスを作製した。このLAT-GFPマウスではどの細胞もGFPを発現し、リンパ球もほとんどがGFP陽性であった。T細胞やマスト細胞では細胞表面とともに内部にもGFPが検出された。これら細胞由来のライセートを超遠心分画法で解析し、LAT-GFPはTriton不溶性のlipid raft分画に存在していることが判明した。この正常細胞に発現しているlipid raftを代表するLAT-GFPを2つの方法で解析した。(1)刺激をしない状態で、lipid raftに存在するGFPがどのような状態であるかを、リアルタイム蛍光一分子イメージング解析を行った。一分子レベルの解析では、LAT-GFPは非常に早い速度で細胞内外を入れ替わっていった。より解像度を下げると複数のGFP分子が同一の挙動をする基点を形成しており、raftの単位と考えられた。(2)人工的に作った脂質二重膜を用いたPlanar membraneのシステムを用いて、T細胞を活性化したときのLAT-GFPの動態を解析した。MHCクラスIIとICAM-1のGPI結合型分子を精製し、脂質二重膜に埋め込んだ膜上に、LAT-GFP発現T細胞を反応させて免疫シナプスを形成させると、一部のLAT-GFPがシナプス中心に集まったが、多くのLAT-GFPは凝集しないままであった。T細胞活性化にraftのシナプスへの凝集が必要でないことを示しているか、または、GM1で検出してきたlipid raftとの多様性を示している可能性も考えられた。

T cell antigen-specific activation, activation, and expression of important molecules in the collection, existence, and field of expression of lipid molecules for visualization purposes, lipid molecules in the LAT intracellular cell expression of EGFP replacement, LAT-GFP, and the use of systemic expression. The LAT-GFP gene is expressed in cells of different sizes, and is expressed in cells of different sizes. T-cell surface The origin of the cells was analyzed by ultra-telecentric analysis, and the existence of Triton insoluble lipid in LAT-GFP was identified. This normal cell development process is represented by LAT-GFP 2. (1)Stimulus, lipid, GFP, lipid, lipid, lipid A molecule is analyzed and LAT-GFP is very fast. The resolution of the GFP molecule is lower than that of the GFP molecule, and the GFP molecule is lower than that of the GFP molecule. (2)Artificial lipid double membrane is used to analyze the dynamics of T cell activation and LAT-GFP. MHC II and ICAM-1 GPI-binding molecules were purified, lipid double membrane was embedded in the membrane, LAT-GFP was developed into T cells, some LAT-GFP was collected in the center, and many LAT-GFP were aggregated. T cell activation, lipid metabolism and aggregation are necessary to demonstrate the diversity of GM1.